大脳皮質ニューロンの分化制御因子の検索

寻找调节大脑皮层神经元分化的因素

基本信息

批准号：
08254207
负责人：
山本亘彦
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08254207/
关键词：
分化大脳 TGF RT-PCR

项目摘要

昨年までに、TGF-βファミリーに保存されたC末端領域の塩基配列をもとに、E14ラットの大脳mRNAからRT-PCR法を用いてそのファミリーに属する分子の検索を行ない、TGF-βファミリーの中のBMPサブファミリーに属する新規分子と推定される断片を得た。PCR断片から全長cDNAが得られ、塩基配列の解析により430アミノ酸から成る蛋白質をコードする遺伝子であることが判明した。この蛋白質はシグナル配列、プロドメインと保存領域から構成され、検索の結果ニワトリのdorsalin-1と最も相同性が高く、アミノ酸配列では保存領域において約80%、ORF全体で約60%の相同性が認められた。その他のTGF-βファミリーとの比較ではBMPサブファミリーと50%程度の相同性があった。この分子の発現が、発生期あるいは神経系に特異的なものであるかを調べるために、E14、E18、P2、成体のラット大脳、間脳、中脳、後脳、E18の骨格筋、内蔵からmRNAを抽出し、RT-PCR法による定量を行なったところ、肝臓を除いては脳での発現が高かった。さらに脳では全ての領域で胎生期に極めて高いレベルの発現が認められたが、領域ごとにそのピーク時期は異なり、神経細胞の産生時期に呼応しているように思われた。以上の結果から、発生期の脳には新規のTGF-βファミリー分子が存在して、neurogenesisに関与することが示唆された。

直到去年，我们根据TGF-β家族保守的C端区域的核苷酸序列，利用RT-PCR从E14大鼠的大脑mRNA中寻找属于TGF-β家族的分子，得到了一个片段，推测是属于BMP亚家族的新分子。从PCR片段中获得全长cDNA，并对碱基序列分析表明该基因编码由430个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白由信号序列、前结构域和保守区组成，搜索发现其与鸡dorsalin-1同源性最高，保守区氨基酸序列同源性约为80%，保守区氨基酸序列同源性约为60%。占整个 ORF 的百分比。与其他 TGF-β 家族的比较表明，与 BMP 亚家族有大约 50% 的同源性。为了研究该分子的表达是否对发育时期或神经系统具有特异性，我们研究了E14、E18、P2、成年大鼠大脑、间脑、中脑、后脑、E18骨骼肌和内脏肌的表达。当提取mRNA并通过RT-PCR定量时，发现除肝脏外，大脑中表达较高。此外，在胚胎时期大脑的所有区域都观察到极高水平的表达，但峰值时间因区域而异，似乎与神经元产生的时间相对应。这些结果表明，发育中的大脑中存在一种新型 TGF-β 家族分子，并参与神经发生。