フリップ-フロップを介した物質輸送

通过人字拖进行大众运输

基本信息

批准号：
07276203
负责人：
小林俊秀
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

フリッパーゼは膜を横切る脂質の移動を触媒するタンパク質である。動物細胞形質膜にはホスファチジルセリンに特異性の高いフリッパーゼが存在していることが知られている。フリッパーゼの機能は分かっていない。我々は培地に加えたホスファチジルセリンがフリッパーゼを介して細胞へと取り込まれることを示唆するデータを得ている(Kobayashi,T.and Arakawa,Y.(1991)J.Cell Biol.113,235-244)。最近我々は高濃度のホスファチジルセリンには細胞毒性があることを見いだした。細胞毒性はホスファチジルセリンに特異的なものでありホスファチジルコインは毒性を示さない。ホスファチジルセリンに特異的な細胞毒性はホスファチジルセリンに特異的な、フリッパーゼを介した脂肪への取り込みに起因するものであることが予想された。そこで変異剤処理したCHO細胞からホスファチジルセリンに耐性の変異株を取得し、細胞表面のフリッパーゼ活性を測定したところ、得られた変異株の40%で活性の低下が見られた。次に変異株での高分子の取り込みについてHorseradish peroxidase(HRP)を用いて測定したところ、取り込み活性は親株の半分程度に減少していた。一方低比重リポタンパク質(LDL)の取り込みは親株と変異株の間で大きな差はなく、フリッパーゼは液性のエンドサイトーシスに関与していることが示唆された。

翻转酶是催化脂质跨膜运动的蛋白质。已知动物细胞质膜中存在对磷脂酰丝氨酸具有高度特异性的翻转酶。翻转酶的功能尚不清楚。我们获得的数据表明添加到培养基中的磷脂酰丝氨酸通过翻转酶被吸收到细胞中(Kobayashi, T.和Arakawa, Y.(1991) J. Cell Biol. 113, 235-244)。最近我们发现高浓度的磷脂酰丝氨酸具有细胞毒性。细胞毒性是磷脂酰丝氨酸特有的，而磷脂酰丝氨酸不表现出毒性。据预测，磷脂酰丝氨酸特异性细胞毒性是由于磷脂酰丝氨酸通过翻转酶特异性摄取到脂肪中造成的。因此，当我们从用诱变剂处理的CHO细胞中获得对磷脂酰丝氨酸具有抗性的突变株并测量细胞表面翻转酶活性时，我们发现获得的突变株中有40%的活性降低。接下来，我们使用辣根过氧化物酶（HRP）测量了突变菌株对聚合物的摄取，发现摄取活性降低至亲本菌株的一半左右。另一方面，亲本菌株和突变菌株对低密度脂蛋白（LDL）的摄取没有显着差异，表明翻转酶参与体液内吞作用。