培養海馬ニューロンの膜形成における糖脂質の機能の解析

糖脂在培养海马神经元膜形成中的作用分析

基本信息

批准号：
06267202
负责人：
小林俊秀
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06267202/
关键词：
海馬ニューロン糖脂質コレラ毒素 MDCK GM3 GM1

项目摘要

1、海馬ニューロンにおける細胞表面糖脂質の分布と動態東京都臨床総合研究所の田井博士より供与された抗糖脂質モノクローナル抗体を用いてニューロンの分化の際の糖脂質の発現の変化を測定した。その結果ガングリオシドGD3がニューロンの分化の初期に発現し、分化に伴い消失することを見いだした。一方コレラトキシンのBサブユニットの結合で見たガングリオシドGM1はニューロンの分化の進行にかかわらず常に細胞表面に発現していた。蛍光抗体法による実験では他のガングリオシドであるGM3,GT1b,GD1bの発現は見られなかった。GM1はニューロンの軸索にも樹状突起/細胞体にも分布していたことから、金コロイドで標識したコレラ毒素を調整し、樹状突起と軸索での動きを高感度ビデオカメラを用いて顕微鏡下で観察した。その結果GM1は軸索ドメインでも樹状突起ドメインでも非常に遅い拡散をしていることがわかった。2、培養上皮細胞におけるGM3の細胞内分布ニューロンの膜形成機構の理解のヒントを得る目的でニューロン同様極性を有している上皮細胞の膜形成に関しても研究を行なっている。培養上皮細胞であるMDCK細胞は先端面と側底面の二つの形質膜を有しており、糖脂質は主として先端面に濃縮されていると言われているが、詳細な検討は行なわれていない。MDCKの主要糖脂質であるGM3に体するモノクローナル抗体を用いてGM3の細胞表面での分布を測定した。メンブレンフィルターに生育させたMDCK細胞は上側を先端面、下側を側底面と配向して配列する。先端面と側底面はタイトジャンクションによって仕切られている。このような細胞は上側からは抗GM3抗体によって間接蛍光抗体法により染色されるが下側からは染色されなかった。またカバーグラス上に生育させたMDCK細胞を抗GM3抗体を用いて染色すると先端面に特徴的な斑点状の染色パターンを示したが、培地からカルシウムを除いてタイトジャンクションをはずすと側底面も染色された。これらの結果はGM3は先端面に局在しており、局在化にはタイトジャンクションが必要であることを示している。

1。在海马神经元中细胞表面糖脂的分布和动力学，使用Tokyo Metropolitan临床研究所的Tokyo Metropolitan研究所TAI提供的抗糖基脂蛋白抗体在神经元分化过程中的糖脂表达变化。结果，我们发现神经节苷脂GD3在神经元分化的早期表达，并随分化而消失。另一方面，尽管神经元分化的进展，但在胆囊毒素B亚基的结合中看到的神经节苷脂GM1在细胞表面不断表达。免疫荧光实验没有其他神经节苷脂GM3，GT1B或GD1B的表达。由于GM1均分布在神经元轴突和树突/细胞体内，因此我们调整了用胶体金标记的霍乱毒素，并使用高敏感的摄像机观察了在显微镜下树突和轴突的运动。结果表明，GM1在轴突和树突状结构域中都非常缓慢。 2。培养的上皮细胞中GM3的细胞内分布我们还在对上皮细胞中的膜形成进行研究，这些细胞具有与神经元相同的极性，目的是提供理解神经元膜形成机制的线索。 MDCK细胞是一种培养的上皮细胞，具有两个质膜，一个尖端和一个基底外侧表面，据说糖脂主要集中在尖端表面，但尚未进行详细的检查。使用形成MDCK的主要糖脂的单克隆抗体测量GM3在细胞表面上的分布。在膜过滤器上生长的MDCK细胞与尖端表面和下侧定向的上侧排列，并以基底外侧为导向。尖端和底部表面被紧密的连接处隔开。通过使用抗GM3抗体的间接荧光抗体方法从顶部染色，但不会从底部染色。此外，当在盖玻片上生长的MDCK细胞用抗GM3抗体染色时，在尖端表面显示了染色模式，这是斑点状染色的特征，但是当从培养基中取出紧密连接时，基底外侧表面也被染色。这些结果表明GM3位于尖端表面，需要紧密的连接处进行定位。