新しく見い出した細胞外マトリックス蛋白質のがん浸潤と転移への関与についての研究

新发现的细胞外基质蛋白参与癌症侵袭和转移的研究

基本信息

批准号：
07273270
负责人：
松本健一
金额：
$ 0.96万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

がん細胞は腫瘍の悪性化に伴って周辺組織へと浸潤・移転する。このがん細胞の浸潤と移転にはすでに秩序だって存在していた正常細胞や細胞外マトリックスの高次構造の破壊が伴う。細胞外マトリックスが正常組織でどのような存在様式をもち、がんの浸潤・移転にともなって壊されていくかは、がん研究における重要な課題である。我々はMHCクラスIII領域の構造解析を行っている際にテネイシン(TN-C)と構造上の類似性の高いテネイシンXの遺伝子を見いだした。現在TN-Xの機能を明かにすることを目的に、ジーン・ターゲティング法によりTN-X欠損マウスの作成を行なっている。TN-X欠損マウスの作成に関して現在までに以下のことを行なった。TN-X遺伝子の5'プロモーター領域及び5'コーディング領域をNeo遺伝子に置き換え、相同領域の異なった3種類のターゲティング・ベクターの構築を行なった。次にエレクトロポレーション法によりES細胞にターゲティングベクターの導入を行ない、約1200個のG418耐性細胞のうち相同組換えを起こした複数個のES細胞をPCR法により同定した。次にこの相同組換えの起こったES細胞を用い、熊本大学・相沢慎一研究室の協力を得てインジェクション法によりキメラマウスの作成をおこなった。ところがどの独立したES細胞由来のキメラマウスにおいても、ES細胞の寄与の低いキメラマウスは得られたが、ES細胞の寄与の高いキメラマウスは得られず胎児期の13日目から16日目の期間に死ぬらしいことが明らかとなった。現在どうしてキメリズムの高いキメラマウスが生まれてこないのか調べているところである。

当肿瘤变得恶性时，癌细胞侵入并迁移到周围组织。癌细胞的这种侵袭和迁移，伴随着正常细胞高阶结构和本来有序存在的细胞外基质的破坏。癌症研究的一个重要问题是细胞外基质如何存在于正常组织中以及当癌症侵袭和扩散时细胞外基质如何被破坏。在对MHC III类区域进行结构分析时，我们发现了腱蛋白X基因，该基因与腱蛋白（TN-C）具有高度的结构相似性。目前，为了阐明TN-X的功能，我们正在利用基因打靶方法创建TN-X缺陷小鼠。关于 TN-X 缺陷小鼠的创建，我们迄今为止已进行了以下工作。将TN-X基因的5'启动子区和5'编码区替换为Neo基因，构建了三种同源区不同的打靶载体。接下来，通过电穿孔将靶向载体导入ES细胞，并通过PCR在约1200个G418抗性细胞中鉴定出多个发生同源重组的ES细胞。接下来，使用发生同源重组的ES细胞，在熊本大学相泽伸一实验室的合作下，通过注射法制作嵌合小鼠。然而，在所有独立ES细胞衍生的嵌合小鼠中，获得了ES细胞贡献率低的嵌合小鼠，但没有获得ES细胞贡献率高的嵌合小鼠，并且很明显他很可能在此期间死亡。我们目前正在研究为什么具有高嵌合性的嵌合小鼠没有出生。