標的遺伝子組換えによるミューテーター(高突然変異)マウスの作製とその発癌への影響

通过定向基因重组创造突变（高度突变）小鼠及其对致癌作用的影响

基本信息

批准号：
07272230
负责人：
續輝久
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究の結果、酸素による遺伝子DNA上の障害の中で、活性酸素によって生じる8-オキソグアニンが自然突然変異の生起に大きく影響し、それを取り除く8-oxo-dGTPase等の酵素系が哺乳動物においてもDNA上の傷害防止に極めて重要な役割を果たしていることを明らかにした。活性酸素に伴うDNA上の傷と自然突然変異および発がんの関連を明らかにし、その過程を分子レベルで解明することを目的に、標的遺伝子組換えの手法により8-oxo-dGTPase遺伝子の変異細胞・変異マウスを作製することを試みた。(1)マウスの染色体DNAを単離してターゲテイング・ベクターを構築し、マウスES細胞に導入後ポジティブ・ネガティブ選別で生えてきたコロニーを解析し、目的とする複数の細胞クローンを得た。これら細胞株をマウスの胚盤胞に導入し、キメラマウスを経て変異マウスを樹立した。得られた変異マウス系統(ヘテロ・ホモ)は外見上明らかな異常は認められないが、現在正常マウスと比較して欠損個体における種々の生物学的指標や突然変異率・発がん率の検討を進めている。(2)ヒトを含む哺乳動物の細胞内にも8-oxo-dGTPase活性を有する蛋白質が存在する。先にヒトの酵素のcDNAをクローニングすることに成功しているが、遺伝子欠損マウスの作製を目指してマウスのcDNAのクローニングとその蛋白質産物の検討を行った。また動物発がん実験におけるラットの重要性を考え、ラットのcDNA及び遺伝子についてもクローニングして調べた。その結果哺乳動物の酵素は156アミノ酸から成り、先に解析された細菌のものに比べてやや大きく、アミノ酸の類似性も全体としては低いが、現在知られている全ての種の酵素を通じて蛋白質の中央部付近によく保存された領域を認め、これが酵素活性にとって重要である可能性を示した。

由于过去的研究，8-氧-DGTPase和其他酶，例如8-氧-DGTPase，它们对氧气引起的遗传DNA突变发生的重大影响，他说哺乳动物也发挥很大的作用。防止DNA损伤的重要作用。通过靶向遗传修饰，8-oxo-DGTPase基因突变细胞阐明了与活性氧相关的DNA伤口和天然代码之间的关系，并在分子水平上阐明了该过程。（1）将小鼠的染色体DNA分离以构建靶向载体，分析了将其引入小鼠ES细胞后在正面分类中生长的菌落，并为此目的获得了多个细胞克隆。将这些细胞引入小鼠胚泡中，并通过嵌合小鼠建立突变小鼠。获得的突变小鼠系统（Hetero Homo）因其异常异常而被认可，但目前正在检查与正常小鼠相比，缺失个体的各种生物学指标和偶然的致癌率。（2）在含有8-氧-DGTPase活性的人类的哺乳动物细胞中也有蛋白质。他早些时候成功地克隆了人类酶的cDNA，但检查了小鼠cDNA及其蛋白产物的克隆以产生基因缺陷小鼠。考虑到大鼠在动物癌实验中的重要性，还检查并检查了大鼠cDNA和基因。结果，哺乳动物的酶由156种氨基酸组成，比以前分析的细菌稍大，整个氨基酸的相似性较低，但是通过所有已知物种的所有酶，蛋白质的蛋白质蛋白质保存良好的区域在中心附近被确认，表明这对于酶活性可能很重要。