脂質二分子膜中のレセプター蛋白による超分子形成とその機能の発現

脂双层膜受体蛋白的超分子形成及其功能表达

• 批准号: 07229209
• 负责人: 梅澤 喜夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07229209/
• 关键词: 人工平面脂質二分子膜; グルタミン酸受容イオンチャンネル; インスリンレセプター; カルモジュリン; 表面プラズモン共鳴; 膜融合; メリチン

本年度の研究業績の概要は以下の様である.1)単分子膜貼り合わせ法により作製した人工平面脂質二分子膜中でグルタミン酸受容イオンチャンネル蛋白のアゴニスト間及びレセプター間の化学選択性を記述することを目的として,アゴニスト活性の異なる二つのタイプのグルタミン酸受容イオンチャンネル蛋白(NMDA及びnon-NMDAタイプ)を包埋した脂質二分子膜複合場において,個々のタイプのレセプターのイオンチャンネル活性を選択的に識別して発現できることを見出した.2)人胎盤から抽出,精製したインスリンレセプターを用いる,インスリンの超分子形成に伴う情報伝達を原理とする新規化学センシング法を構築することを目的として,そのために必要なインスリンレセプターの単離,精製及びその同定を行い,組織重量当たり収率約0.01%でインスリンレセプターを得ることに成功した.3)牛脳から単離,精製したカルモジュリン(CaM)蛋白と合成ペプチドM13(ミオシン軽鎖カイネースのCaM結合部位のモデルペプチド)を用いて,超分子(Ca^<2+>/CaM/M13三元錯体)の形成に基づく表面プラズモン共鳴(SPR)の変化を測定することに成功した.4)極性基の異なるリン脂質,フォスファチジルセイン(PS)及びフォスファチジルコリン(PC)単独のリポソーム(SUV)が,メルカプトプロピオン酸で疎水化した金電極上へ融合する過程をspr法によりreal timeで観測することに初めて成功した.また,この疑似凝集生体膜上での蜂毒メリチン反応を同じくSPR法で追跡できることを見い出した.

今年的研究成果总结如下： 1）描述了通过单层键合方法制备的人工平面脂质双层中谷氨酸受体离子通道蛋白的激动剂和受体之间的化学选择性。蛋白质（NMDA 和非我们发现每种类型受体的离子通道活性都可以在嵌入NMDA型的脂质双层膜复合物中被选择性识别和表达2)使用从人胎盘中提取和纯化的胰岛素受体，旨在构建新的胰岛素受体。基于伴随胰岛素超分子形成的信息传输原理的化学传感方法。我们分离、纯化和鉴定了此目的所需的胰岛素受体，并成功以单位重量约0.01%的产率获得了胰岛素受体3)从牛脑中分离纯化的钙调蛋白(CaM)和合成肽M13。 （肌球蛋白轻链激酶 CaM 结合位点的模型肽），超分子（Ca^2+>我们成功地测量了基于具有不同极性基团的磷脂、磷脂酰胆碱（/CaM/M13三元复合物）形成单一脂质体（SUV）（PC）的表面等离振子共振（SPR）的变化。 ) 融合到用巯基丙酸疏水化的金电极上是使用 SPR 方法实现的。我们首次利用SPR方法成功观察到了这种假聚集生物膜上的蜂毒蜂毒肽反应。

项目成果

S. Nishizawa: "Anion Recognition by Urea and Thiourea Groups: Remarkably Simple Neutral Receptors for Dihydrogenphosphate" Tetrahedron Letters. 36. 6483-6486 (1995)

S. Nishizawa：“尿素和硫脲基团的阴离子识别：磷酸二氢盐的非常简单的中性受体”四面体快报。

P. Buhlmann: "Studies on the Phase Boundaries and the Significance of Ionic Sites of Liquid Membrane Ion-Selective Electrodes" Electroanalysis. 7. 811-816 (1995)

P. Buhlmann：“液膜离子选择性电极的相边界和离子位点意义的研究”电分析。