脂質二分子膜中のレセプター蛋白による超分子形成とその機能の発現

脂双层膜受体蛋白的超分子形成及其功能表达

基本信息

批准号：
08219208
负责人：
梅澤喜夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(i)グルタミン酸受容イオンチャンネル蛋白が三種のアゴニスト(NMDA,L-グルタミン酸,L-CCG-IV)に対して示す化学選択性を,binding assayではなく,より生理的条件に近い指標(チャンネルを透過したイオンの全数)を用いて評価することを可能にした.すなわち,グルタミン酸受容イオンチャンネル蛋白の化学選択性の評価を,同一膜を用いて評価することにより,膜に包埋したレセプター数に依存しない新しい化学選択性の評価法を提案した.NMDAサブタイプのGluRに対する,3種の典型的アゴニストN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)及びL-グルタミン酸,L-2-(カルボキシシクロプロピル)グリシン(L-CCG-IV)のチャンネル活性能の序列はL-CCG-IV>L-グルタミン酸>NMDAの順になり,binding affinityの序列と一致した.しかしその相対値の差はbinding affinityのそれと比べて著しく縮まっていた(Biosensors & Bioelectronics,印刷中).(ii)チャンネルを透過する特定のイオン種に基づいてGluRの化学選択性を評価する方法を開発した.グルタミン酸受容イオンチャンネル蛋白を包埋したリポソームからチャンネルを通って放出されるCa^<2+>の量を薄層ポテンシオメトリーによって測定することに成功し,その結果NMDA-サブタイプのGluRに対する上記3種のアゴニスト間の選択性は,(i)で求めた平膜系での選択性と一致した(投稿準備中).(iii)膜蛋白インスリン受容体(人胎盤より抽出)を用い,インスリンとの超分子形成に基づく情報伝達系(レセプター自身のリン酸化とそれに続く外因性其質IRS-1のリン酸化)を組み込んだ化学センシングシステムの構築に成功した.生理適合性を有する化学選択性を評価できる(投稿準備中).

(i) 谷氨酸接受离子通道蛋白通过结合对三种类型的激动剂（NMDA、L-谷氨酸、L-CCG-IV）表现出化学选择性这使得使用相同的膜评估谷氨酸接受离子通道蛋白的化学选择性成为可能。我们提出了一种不依赖于膜中嵌入的受体数量的评估化学选择性的新方法。三种典型激动剂N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、L-谷氨酸和L-2-(羧基环丙基)甘氨酸(L-CCG-IV)对NMDA亚型GluR的通道活性结合能力顺序为L。 -CCG-IV > L-谷氨酸 > NMDA。然而，相对值的差异明显小于结合亲和力的差异（Biosensors &生物电子学，待出版）（ii）我们开发了一种基于渗透通道的特定离子种类来评估 GluR 的化学选择性的方法，我们成功地测量了 NMDA 亚型 GluR 中的 Ca^2+ 量。薄层电位法，结果表明上述三种类型的NMDA亚型GluR激动剂之间的选择性与（i）中确定的平膜系统的选择性一致（准备提交）（iii）使用膜蛋白胰岛素受体（从人胎盘中提取），我们成功构建了化学传感系统。它结合了基于分子形成的信息转导系统（受体本身的磷酸化和随后的外源蛋白IRS-1的磷酸化）。可以评估化学选择性与生理相容性（准备提交）。