細胞周期の分子機構とその抑制剤の開発

细胞周期的分子机制及其抑制剂的开发

基本信息

批准号：
06283208
负责人：
吉田稔
金额：
$ 23.68万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.酵母のtwo-hybrid遺伝子発現系を用いた癌遺伝子機能阻害物質の探索Ras/RaおよびRas/CDC25相互作用阻害物質の検出系を構築し、これを用いて広範なスクリーニングを行ったが、現在までのところ新規の活性物質は得られていない。しかし、我々がすでにSrcキナーゼを阻害する細胞周期阻害剤として同定したラディシコールがこの系でのRas/Raf結合を特異的に阻害することが判明し、その作用機構の解析を行った。v-Ha-rasトランスフォーム細胞を用いて細胞内でのRas/Rafの結合に対する効果を調べたところ、それを強く阻害することが判明した。本物質は、in vivoでRas/Raf結合を阻害する初めての物質であると考えられる。一方、in vitroでの直接的な結合阻害は認められず、in vivoでの結合阻害には、Rafのキナーゼドメインの存在が必要であることが分かった。2.Preussin耐性遺伝子のクローン化我々は分裂酵母cdc25変異株に対し選択的に作用する物質としてPreussinを得た。その作用機構を解析する目的でcdc25変異株を用いその超感受性を相補する遺伝子のクローン化を行いHSP70をコードするhsp1/sks2をクローン化した。本遺伝子の破壊株は、生育可能であったが、増殖速度が低下し、破壊株とcdc25との2重変異株は、著しい増殖速度の低下、制限温度の低下、Preussin処理したcdc25変異株と同様の形態異常を示し、Preussinの作用はHSP70と関連する可能性が示唆された。

1.利用酵母双杂交基因表达系统寻找癌基因功能抑制剂我们构建了Ras/Ra和Ras/CDC25相互作用抑制剂的检测系统，并利用该系统进行了广泛的筛选，迄今为止，尚未获得新的活性物质。然而，我们发现我们之前鉴定为抑制Src激酶的细胞周期抑制剂的根赤考（radicicol）特异性地抑制该系统中Ras/Raf的结合，并分析了其作用机制。当我们使用 v-Ha-ras 转化细胞研究对细胞内 Ras/Raf 结合的影响时，我们发现它受到强烈抑制。该物质被认为是第一种在体内抑制Ras/Raf结合的物质。另一方面，在体外没有观察到对结合的直接抑制，并且发现Raf激酶结构域的存在对于体内结合的抑制是必需的。 2.普鲁士抗性基因的克隆我们获得了普鲁士作为选择性作用于裂殖酵母CDC25突变株的物质。为了分析其作用机制，我们利用CDC25突变株克隆了与其超敏反应互补的基因，并克隆了编码HSP70的hsp1/sks2。该基因被破坏的菌株能够生长，但生长速度降低，并且被破坏的菌株和CDC25的双突变菌株的生长速度明显降低，限制温度较低，而普鲁士处理的CDC25突变菌株的生长速度明显下降。观察到类似的形态异常，表明Preussin的作用可能与HSP70有关。