タバコ培養細胞系におけるアミロプラストの誘導と細胞肥大のホルモンによる制御

培养烟草细胞系中淀粉体诱导和细胞肥大的激素控制

基本信息

批准号：
06269206
负责人：
酒井敦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

タバコ培養細胞BY-2は、合成オーキシンである2,4-D(0.2mg/l)を含む通常の培地中では活発に細胞増殖を行い、その色素体は培養の全期間を通じて未分化な原色素体の状態を保つ。一方、2,4-Dを含まず、合成サイトカイニンであるBA(1mg/l)を添加した改変培地中では細胞はほとんど増殖せずに著しく大型化し、色素体は大量のデンプンを蓄積してアミロプラストに変換する(Sakai et al.1992)。今年度は、BY-2細胞の植物ホルモンに対する応答を詳細に解析し、アミロプラストの分化誘導に関しては-2,4D,+BAの条件が最良であることを確認した。しかし、ホルモンを全く含まない(-2,4-D,-BA)培地中でもデンプンの蓄積が認められることから、BY-2のアミロプラスト分化誘導では2,4-Dの除去が第一の要因であり、BAは2,4-Dの除去によって生じる変化を促進していると考えられる。それぞれのホルモンに対する応答を調べた結果、2,4-Dは細胞増殖を促進し、デンプン蓄積を抑制すること、BAは逆に細胞増殖を抑制し、デンプン蓄積を促進すること、そしてこれらの反応はホルモン濃度依存的であることが確認された。2,4-DとBA以外のオーキシンやサイトカイニンも類似の作用を示すことから、これらはオーキシン、サイトカイニンに共通の効果であると考えられる。各種培養条件を比較すると、細胞増殖率の低下とデンプン蓄積量の増大は平行関係にあった。しかし、真核型ポリメラーゼαの阻害剤であるアフィディコリンを添加して細胞の増殖を強制的に停止させても、デンプンの蓄積量は培地の種類ごとに明らかに異なっていた。したがって、デンプンの蓄積は増殖率の低下によって二次的にもたらされるのではなく、ホルモンにより独自の制御を受けていると考えられる。また、単離色素体核を用いたin vitroアッセイ系によりアミロプラスト分化過程における色素体ゲノムの機能変化を調べた結果、転写・複製活性ともに不活発であることが明らかになった。

烟草培养细胞BY-2在正常培养基中积极增殖细胞，包括2,4-D（0.2 mg/L），合成轴，色素颜料在整个培养物中都没有分化。另一方面，在不包括2,4-D并添加Ba（1mg/L）的修饰培养基中，合成部位的Kainin，细胞明显更大，而不会生长，并且颜料会积聚大量的淀粉以积累A大量淀粉（Sakai et al.1992）今年，我们详细分析了BY -2细胞的植物激素的反应，并确认-2,4D，+BA条件是淀粉样分化的最佳方法。但是，由于在根本不包含激素的培养基中观察到淀粉的积累（-2,4-D，-BA），因此去除2,4-D是BY-2淀粉样品的第一个因素是的。由于检查对每种激素的反应，2,4-D促进细胞的生长，抑制淀粉的积累，而BA在对比中，可促进细胞生长并促进淀粉的积累，并确认激素浓度取决于。除2,4-D和BA外，Axin和Site Chinin也显示出相似的作用，因此它们被认为是对Axin和Site Chinin的常见作用。比较各种培养条件，平行于细胞增殖和淀粉积累的增加。但是，即使是立方聚合酶α的抑制剂的替迪酯，可以强行停止细胞增殖，但每种类型的培养基的淀粉积累量明显不同。因此，人们认为淀粉的积累不是由于增殖的减少而不是次要的，而是通过激素进行了自身的控制。此外，通过使用gololicolic核的体外测定系统检查彩色基因组在淀粉样细胞分化过程中的功能变化，很明显，转移和重复活性都是不合适的。