真核生物DNA修復反応におけるDNAポリメラーゼβ及びεの役割

DNA 聚合酶 β 和 ε 在真核 DNA 修复反应中的作用

基本信息

批准号：
06263209
负责人：
杉野明雄
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06263209/
关键词：
DNA repair DNA ポリメラーゼβ DNA ポリメラーゼε Yeast Saccharomyces cerevisiae in vitro DNA repair double strand break repair

项目摘要

1)出芽酵母DNAポリメラーゼIV(高等動物DNAポリメラーゼβのホモログ)の役割高等動物DNAポリメラーゼβのホモログである出芽酵母DNAポリメラーゼIVを完全に欠く突然変異株を使用し各種のDNA修復反応に及ぼす影響を検討した結果、DNAポリメラーゼIVに二本鎖DNA切断修復(double-strand break DNA repair)反応に関与することが明らかになった。また突然変異株では減数分裂時特異的相同性組換え頻度が野生株に比較して10倍程度上昇していた。従って組換え反応の中間体である二本鎖切断部位にDNAポリメラーゼIVは組換え酵素と拮抗して働き、DNA鎖の修復に働いていると考えられる。2)in vitro DNA修復系の構築及びその系でのDNAポリメラーゼII(ε)とIVの働きIn vivoを反映したin vitro DNA修復系の構築を出芽酵母核抽出液より行った。同様にDNAポリメラーゼII(ε)の温度感受性変異株及びDNAポリメラーゼIV欠損株より核抽出液を調製し、UV_-,O_SO_<4->,その他のDNA損傷剤で処理したDNAの修復をin vitroで測定した。その結果、少なくともUV_-,O_SO_<4->,処理したDNAの修復反応にはこれらの二つのDNAポリメラーゼが関与している結果が得られなかった。この結果は、既にTexas大学のE.Friedberg等が発表した結果と相違するものである。

1）葡萄糖酵母DNA聚合酶IV（较高动物DNA聚合酶β的同源物）的作用我们使用了完全缺乏糖酸酯DNA聚合酶IV的突变菌株IV（一种较高动物DNA聚合酶β的同源物），并研究了对各种DNA修复反应的影响。结果表明，DNA聚合酶IV参与双链断裂DNA修复反应。此外，与野生菌株相比，突变菌株期间减数分裂特异性同源性重组的频率增加了约10倍。因此，据信DNA聚合酶IV与双链断裂位点的重组酶具有拮抗作用，该酶是重组反应中的一个中间体，并作用于修复DNA链。 2）在该系统中构建体外DNA修复系统以及该系统中DNA聚合酶II（ε）和IV的功能是由萌芽的酵母核提取物构建的，反映了体内。类似地，从温度敏感的突变菌株的DNA聚合酶II（ε）和DNA聚合酶IV缺陷菌株中制备了核提取物，并在体外测量了用UV_-，O_SO_ <4->和其他DNA损伤药物处理的DNA的修复。结果，没有得到这两个DNA聚合酶参与UV_-，O_SO_ <4->和处理过的DNA的维修反应的结果。该结果与E. Friedberg等人已经发布的结果不同。德克萨斯大学。