核局在化シグナルによって活性化されるキナーゼの同定とその機能解析

核定位信号激活激酶的鉴定及其功能分析

• 批准号: 06262214
• 负责人: 米田 悦啓
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06262214/
• 关键词: 核蛋白質; 細胞周期; 低分子量G蛋白質; シグナル伝達; 核蛋白質輸送; マイクロインジェクション; 核

本研究者はこれまで細胞内情報伝達のメカニズムに興味を持ち、その解析に必要と考えられる細胞質から核への蛋白質の輸送機構の解明を目指してきた。細胞周期を調節するメカニズムの1つとして細胞質から核へのシグナル因子の移行の制御が考えられ、細胞周期の進行に重要な働きをすると考えられるRCC1-Ran/TC4システムに着目して研究を進めてきた。RCC1遺伝子に変異のある温度感受性突然変異細胞株であるtsBN2細胞を用いたこれまでの研究から、主として核内に豊富に存在する低分子量G蛋白質であるRan/TC4が細胞質から核への蛋白質の輸送を制御していることを明らかにしてきた。本年度は、さらにこの研究を押し進め、分子レベルでの詳細な解析を行った結果、以下の事実が明かとなった。1.培養細胞の細胞質に導入したRan/TC4に対する抗体は、核蛋白質の核への移行を阻害した。2.tsBN2細胞を非許容温度下で培養して、核蛋白質の輸送活性が低下している状態で、GTP結合型Ran/TC4を細胞質に導入すると、核蛋白質の輸送活性は回復し、この時Ran/TC4自身も核へ移行することがわかった。野生型の細胞の細胞質GDP結合型Ran/TC4を導入すると、核蛋白質の輸送活性は低下し、この場合、ほとんどのRan/TC4は細胞質に留まったままであった。また、同様に、GTPγSを結合させたRan/TC4を細胞質に導入した場合、核蛋白質輸送は完全に阻害された。以上の事実から、核蛋白質輸送は、Ran/TC4のGTP-GDP交換反応を通して制御を受け、核蛋白質輸送に対して、GTP結合型は促進的に、GDP結合型は抑制的に働くことが明かとなった。今後、この制御機構が細胞周期の進行にどのように働くのかを明らかにしていきたい。

该研究人员对细胞内信息传递的机制很感兴趣，旨在阐明蛋白质从细胞质到细胞核的转运机制，这对于分析来说是必要的。控制信号因子从细胞质到细胞核的转移被认为是调节细胞周期的机制之一，我们的研究重点是RCC1-Ran/TC4系统，该系统被认为在细胞周期中发挥着重要作用进展就在这里。先前使用 tsBN2 细胞（一种 RCC1 基因突变的温度敏感突变细胞系）的研究表明，Ran/TC4（一种大量存在于细胞核中的低分子量 G 蛋白）负责将蛋白质从细胞质转运到细胞核很明显，他们正在控制交通。今年，我们进一步推进了这项研究，在分子水平上进行了详细分析，揭示了以下事实。 1.将针对Ran/TC4的抗体引入培养细胞的细胞质中，抑制核蛋白向细胞核的易位。 2.当将GTP结合的Ran/TC4引入到细胞质中，而tsBN2细胞在不允许的温度下培养并且核蛋白转运活性降低时，发现Ran/TC4本身恢复核蛋白转运活性；也迁移至细胞核。当GDP结合的Ran/TC4被引入野生型细胞的细胞质时，核蛋白转运活性下降，大部分Ran/TC4保留在细胞质中。类似地，当与GTPγS结合的Ran/TC4被引入细胞质时，核蛋白转运被完全抑制。从以上事实可以清楚地看出，核蛋白转运是通过 Ran/TC4 的 GTP-GDP 交换反应来调节的，GTP 结合型起到促进核蛋白转运的作用，而 GDP 结合型则起到抑制核蛋白转运的作用。这成了一件事。将来，我们希望阐明这种控制机制在细胞周期进程中如何发挥作用。