核蛋白質の核内移行を阻害する抗体を用いた発癌における情報伝達機構の解析

利用抑制核蛋白核转位的抗体分析致癌过程中的信息转导机制

• 批准号: 01015062
• 负责人: 米田 悦啓
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015062/
• 关键词: 細胞増殖因子; 細胞内情報伝達機構; マイクロインジェクション; 核局在化シグナル; リン酸化蛋白質

細胞増殖機構や癌化のメカニズムを考える場合、細胞膜でおこった変化が、DNA複製や遺伝子発現の場である核へ、何らかの形でシグナルとして伝達されることが必要と思われる。細胞増殖因子が細胞膜の受容体と結合した後、引きおこされる複雑な細胞内情報伝達系での細胞膜付近でおこる初期反応については解明されつつあり、蛋白質のリン酸化が発癌に重要な役割を果していることがわかってきた。しかし、どのリン酸化蛋白質が発癌にとって重要か、どのようにして情報を核に伝達しているのかといった問題は全く未解明である。本研究では、先ずBALB/3T3(A31)細胞をG_0期に同調させた後、増殖因子の刺激によってG_0期からS期に移行させるという系で、核蛋白質の核内移行を阻害する抗体の及ぼす効果を調べた。増殖因子で刺激する直前に、A31細胞の細胞質にこの抗体をマイクロインジェクションしておく。4〜6時間刺激した後、再び刺激を止める。刺激開始から18〜20時間後に、^3Hーチミジンのとりこみをオートラジオグラフィーで判定し、S期に移行している細胞の割合を計測する。すると、抗体をインジェクションした方の細胞群では、コントロールの細胞群と比較して、S期に移行している細胞の割合が1/2〜1/3に低下していることがわかった。従って、この抗体によって阻害される機構を利用して核内に移行する物質の中に、情報伝達にとって重要な物質が含まれると考えられる。この分子を同定するため、我々は先ず、抗体が認識する抗原の同定を試みた。抗体に結合し、かつ核蛋白質のもつ核局在化シグナルと反応する蛋白質として分子量69KDaの分子(p69)が同定された。このp69に増殖因子刺激で特異的に結合する蛋白質分子が同定できればその分子が細胞増殖機構のシグナル伝達で重要な働きをする分子と考えられ、現在その分子の同定を進めている。

在考虑细胞增殖和癌症发育的机制时，似乎有必要以某种方式作为信号传输到细胞核的变化，该信号是DNA复制和基因表达的位点。在细胞生长因子与细胞膜中结合后发生的复杂细胞内信号传导系统中细胞膜附近发生的初始反应正在变得清晰，并且已经发现蛋白质磷酸化在致癌中起着重要作用。但是，诸如哪些磷酸化蛋白质对癌症至关重要的问题以及如何传递到细胞核的信息是完全未知的。在这项研究中，我们研究了在BALB/3T3（A31）细胞首先同步到G_0相的系统中抑制核蛋白易位的抗体的作用，然后通过刺激生长因子从G_0相过渡到S相。在用生长因子刺激之前，将抗体显微注射到A31细胞的细胞质中。刺激4-6小时，然后再次停止刺激。刺激发作后18-20小时，通过自显影术确定 ^3H-胸苷的掺入，并测量过渡到S相的细胞的比例。这表明，与对照细胞组相比，在已注入抗体的细胞组中，注射到S相中的细胞比例从1/2降低至1/3。因此，人们认为对于信息传输很重要的物质被包括在使用该抗体抑制的机制中迁移到核中的物质。为了识别该分子，我们首先尝试识别抗体识别的抗原。分子量为69 kDa的分子（p69）已被鉴定为一种与抗体结合并与核蛋白的核定位信号反应的蛋白质。如果可以确定通过生长因子刺激特异性结合p69的蛋白质分子，则认为该分子将是信号传达细胞增殖机制的重要作用，并且我们目前正在识别分子。

项目成果

Yosuke Matsuoka: "Isolation and characterization of a monoclonal antibody that inhibits transport of nuclear proteins into the nucleus." Cell Structure and Function. 14. 963 (1989)

Yosuke Matsuoka：“抑制核蛋白转运至细胞核的单克隆抗体的分离和表征。”