核蛋白質の核内移行を阻害する抗体を用いた発癌における情報伝達機構の解析

利用抑制核蛋白核转位的抗体分析致癌过程中的信息转导机制

• 批准号: 01015062
• 负责人: 米田 悦啓
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015062/
• 关键词: 細胞増殖因子; 細胞内情報伝達機構; マイクロインジェクション; 核局在化シグナル; リン酸化蛋白質

細胞増殖機構や癌化のメカニズムを考える場合、細胞膜でおこった変化が、DNA複製や遺伝子発現の場である核へ、何らかの形でシグナルとして伝達されることが必要と思われる。細胞増殖因子が細胞膜の受容体と結合した後、引きおこされる複雑な細胞内情報伝達系での細胞膜付近でおこる初期反応については解明されつつあり、蛋白質のリン酸化が発癌に重要な役割を果していることがわかってきた。しかし、どのリン酸化蛋白質が発癌にとって重要か、どのようにして情報を核に伝達しているのかといった問題は全く未解明である。本研究では、先ずBALB/3T3(A31)細胞をG_0期に同調させた後、増殖因子の刺激によってG_0期からS期に移行させるという系で、核蛋白質の核内移行を阻害する抗体の及ぼす効果を調べた。増殖因子で刺激する直前に、A31細胞の細胞質にこの抗体をマイクロインジェクションしておく。4〜6時間刺激した後、再び刺激を止める。刺激開始から18〜20時間後に、^3Hーチミジンのとりこみをオートラジオグラフィーで判定し、S期に移行している細胞の割合を計測する。すると、抗体をインジェクションした方の細胞群では、コントロールの細胞群と比較して、S期に移行している細胞の割合が1/2〜1/3に低下していることがわかった。従って、この抗体によって阻害される機構を利用して核内に移行する物質の中に、情報伝達にとって重要な物質が含まれると考えられる。この分子を同定するため、我々は先ず、抗体が認識する抗原の同定を試みた。抗体に結合し、かつ核蛋白質のもつ核局在化シグナルと反応する蛋白質として分子量69KDaの分子(p69)が同定された。このp69に増殖因子刺激で特異的に結合する蛋白質分子が同定できればその分子が細胞増殖機構のシグナル伝達で重要な働きをする分子と考えられ、現在その分子の同定を進めている。

当考虑细胞增殖和癌变的机制时，细胞膜中发生的变化似乎有必要以某种方式作为信号传递到细胞核，细胞核是 DNA 复制和基因表达的场所。细胞生长因子与细胞膜受体结合后触发的复杂细胞内信号转导系统中细胞膜附近发生的初始反应正在被阐明，并且我已经知道蛋白质磷酸化在致癌过程中发挥着重要作用。 。然而，诸如哪些磷酸化蛋白对致癌作用很重要以及信息如何传递到细胞核等问题仍然完全未知。在本研究中，我们首先将 BALB/3T3 (A31) 细胞同步至 G_0 期，然后通过生长因子刺激将其从 G_0 期转变为 S 期，并研究其效果。在用生长因子刺激之前，将该抗体显微注射到 A31 细胞的细胞质中。刺激4-6小时后，再次停止刺激。刺激开始后18至20小时，通过放射自显影测定^ 3 H-胸苷摄取，并测量已转变至S期的细胞的百分比。他们发现，在注射抗体的细胞组中，转变为S期的细胞百分比比对照细胞组低1/2至1/3。因此，认为利用该抗体抑制的机制迁移到细胞核的物质中包括对信息传递重要的物质。为了识别该分子，我们首先尝试识别抗体识别的抗原。分子量为69KDa的分子（p69）被鉴定为与抗体结合并与核蛋白的核定位信号发生反应的蛋白质。如果我们能够鉴定出一种在生长因子刺激下与p69特异性结合的蛋白质分子，我们相信该分子在细胞增殖机制中的信号转导中发挥着重要作用，我们目前正在努力鉴定该分子。

项目成果

Yosuke Matsuoka: "Isolation and characterization of a monoclonal antibody that inhibits transport of nuclear proteins into the nucleus." Cell Structure and Function. 14. 963 (1989)

Yosuke Matsuoka：“抑制核蛋白转运至细胞核的单克隆抗体的分离和表征。”