神経伝達物質放出の制御における細胞骨格及びその調節系の関与

细胞骨架及其调节系统参与控制神经递质释放

基本信息

批准号：
06253203
负责人：
櫻井隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経伝達物質放出のモデルとされている副腎髄質クロム親和細胞において、細胞膜直下のアクチンフィラメントが分泌刺激時に細胞膜と融合する分泌顆粒の数を調節している可能性が示唆されている。Trifaroは一連の研究により副腎髄質クロム親和細胞においてはscinderin(アドセバリンと同一の蛋白)が、Ca^<2+>・イノシトールリン脂質依存性にアクチンフィラメントの構造変化を引き起こしていることを示してきた。我々はアドセバリンのcDNAクローンを利用することにより、遺伝子工学的にアドセバリンの発現量を変化させ、この蛋白質の分泌量調節における生理的機能を検討することを計画した。遺伝子工学的操作の難しい初代培養のクロム親和細胞ではなく、ラット由来の株化細胞であるPC12において検討を行うために、ウシアドセバリンcDNAをプローブとしてラット腎のcDNAライブラリーをスクリーニングし、ラットアドセバリンの3′側に相当するcDNAクローンを得た。さらに、この塩基配列をもとに5′RACE法により全長のcDNAクローンを得た。現時点までに全長の塩基配列を決定し終わっている。顆粒と細胞膜のドッキング以降Ca^<2+>濃度の上昇により膜の融合にいたる過程は解明されつつあるが、このドッキングに至る直前の過程は各種のセカンドメッセンジャーの作用により分泌量を制御している可能性がある点で重要と考えられるが未だ十分には解明されていない。アクチンフィラメント系はいろいろな面からこれらの過程に関与していると考えられるが、このフィラメントの構造をCa^<2+>・イノシトールリン脂質依存性に変化させるアドセバリンのはこの調節系の重要な因子の候補の1つと考えられる。得られたcDNAを利用しアンチセンスDNAまたはRNAによりその発現を抑えた場合の影響を現在PC12細胞において検討中である。

在被认为是神经递质释放模型的肾上腺髓质嗜铬细胞中，有人认为细胞膜正下方的肌动蛋白丝可以调节在分泌刺激下与细胞膜融合的分泌颗粒的数量。 Trifaro通过一系列研究表明，在肾上腺髓质嗜铬细胞中，scinderin（与adsevalin相同的蛋白质）以Ca 2+ 和肌醇磷脂依赖性方式引起肌动蛋白丝的结构变化。我们计划利用Adcevalin的cDNA克隆，通过基因工程改变Adcevalin的表达水平，并研究调节该蛋白分泌水平的生理功能。为了在 PC12（一种大鼠来源的已建立细胞系）中进行研究，而不是在原代培养的嗜铬细胞中进行研究，因为原代培养的嗜铬细胞很难通过基因工程操作，我们使用牛 Adsevalin cDNA 作为探针 A 筛选了大鼠肾脏 cDNA 文库。获得对应于3'侧的cDNA克隆。此外，基于该核苷酸序列，使用5'RACE方法获得全长cDNA克隆。迄今为止，全长核苷酸序列已确定。颗粒和细胞膜对接后由于Ca 2+ 浓度增加而导致膜融合的过程正在被阐明，但是紧接着该对接之前的过程涉及通过各种第二信使的作用来控制分泌量。被认为很重要，因为有可能肌动蛋白丝系统被认为以多种方式参与这些过程，但将这种丝的结构改变为Ca 2+ 和肌醇磷脂依赖性的adsevalin是该调节系统的重要组成部分。被认为是候选因素之一。我们目前正在研究使用反义DNA或RNA在PC12细胞中抑制所获得的cDNA表达的效果。