神経伝達物質放出の制御における細胞骨格及びその調節系の関与

细胞骨架及其调节系统参与控制神经递质释放

基本信息

批准号：
06253203
负责人：
櫻井隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経伝達物質放出のモデルとされている副腎髄質クロム親和細胞において、細胞膜直下のアクチンフィラメントが分泌刺激時に細胞膜と融合する分泌顆粒の数を調節している可能性が示唆されている。Trifaroは一連の研究により副腎髄質クロム親和細胞においてはscinderin(アドセバリンと同一の蛋白)が、Ca^<2+>・イノシトールリン脂質依存性にアクチンフィラメントの構造変化を引き起こしていることを示してきた。我々はアドセバリンのcDNAクローンを利用することにより、遺伝子工学的にアドセバリンの発現量を変化させ、この蛋白質の分泌量調節における生理的機能を検討することを計画した。遺伝子工学的操作の難しい初代培養のクロム親和細胞ではなく、ラット由来の株化細胞であるPC12において検討を行うために、ウシアドセバリンcDNAをプローブとしてラット腎のcDNAライブラリーをスクリーニングし、ラットアドセバリンの3′側に相当するcDNAクローンを得た。さらに、この塩基配列をもとに5′RACE法により全長のcDNAクローンを得た。現時点までに全長の塩基配列を決定し終わっている。顆粒と細胞膜のドッキング以降Ca^<2+>濃度の上昇により膜の融合にいたる過程は解明されつつあるが、このドッキングに至る直前の過程は各種のセカンドメッセンジャーの作用により分泌量を制御している可能性がある点で重要と考えられるが未だ十分には解明されていない。アクチンフィラメント系はいろいろな面からこれらの過程に関与していると考えられるが、このフィラメントの構造をCa^<2+>・イノシトールリン脂質依存性に変化させるアドセバリンのはこの調節系の重要な因子の候補の1つと考えられる。得られたcDNAを利用しアンチセンスDNAまたはRNAによりその発現を抑えた場合の影響を現在PC12細胞において検討中である。

有人提出，在肾上腺髓质蛋白细胞（是神经递质释放模型的模型）中，肌动蛋白细胞直接下方的细胞膜下方可能调节分泌刺激后与细胞膜融合的分泌颗粒的数量。 Trifaro在一系列研究中表明，Scinderin（与Adsevalin相同的蛋白质）导致Ca^<2+>肌醇磷脂依赖性依赖性依赖性肌动蛋白丝的变化。我们计划使用Adsevalin cDNA克隆来改变遗传上的Adsevalin的表达水平，并研究在调节该蛋白质的分泌水平时的生理功能。为了研究一种大鼠衍生的细胞系PC12的结果，而不是难以设计的铬蛋白细胞的原发性培养物，我们使用牛sevalin cdna筛选了大鼠肾脏cDNA库作为探针，以获得与大鼠adsevalin 3'侧相对应的cDNA克隆。此外，基于此基础序列，通过5'race方法获得了全长cDNA克隆。全长核苷酸序列已在此时间确定。由于颗粒和细胞膜对接后Ca^<2+>浓度的增加而导致膜融合的过程开始澄清，但是在对接之前的这一过程被认为是重要的，因为它可能会由于各种第二企业的作用而控制了分泌物，但尚未完全澄清。肌动蛋白细丝系统被认为以许多方式参与了这些过程，但是将这种细丝的结构变成Ca^<2+>肌醇磷脂依赖性方式的Adsevalin被认为是该调节系统的重要因素之一。目前正在PC12细胞中研究用反义DNA或RNA抑制获得的cDNA表达的影响。