温度ジャンプNMRを用いた金属タンパク質の多元的構造と反応過程制御の研究

温跃核磁共振研究金属蛋白多维结构及反应过程控制

基本信息

批准号：
03241213
负责人：
赤坂一之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.市販品を精製して得たウマ心臓メトミオグロビンについて、30mg/mlの高濃度でも可逆的に変性が起こる条件を種々検討した結果、重水溶液中pH5.35前後で2MUreaを共存させることにより、且つ低温変性を利用することによってこれが可能であることがわかった。2.上記条件下でのミオグロビンを0℃で一定時間低温変性状態に保った後、35℃に急速に昇温することにより誘起される天然構造の形成過程を温度ジャンププロトンNMRにより追跡した.その結果、ポリペプチド鎖全体がほぼ同時に協同的に巻き戻ることがわかった。その平均時定数は0℃に30分後保った場合210秒であった。この高次構造形成の速度は低温変性状態での保持時間に存在する。このことは低温変性に少なくとも二つの状態が存在することを示唆している。3.ここで観測されたミオグロビンの高次構造の形成はヘムとの相互作用によりもたらされたものである。高次構造の完結に先立ってヘムとアポ蛋白質との間で何らかの会合中間体が形成され、いくつかの段階を経て最終的な構造が形成されるものと考えられるが、これまでのところこのような中間体のスペクトルを特定するには至らなかった。4.以上の実験によって温度ジャンプNMRに適した実験系と実験条件を確立することができた。今後は高速温度ジャンプNMR検出器を用いて、速い過程で形成される多元的構造中間体の研究を行う予定である。

1。已经对条件进行了各种研究，即即使在高浓度30 mg/ml的情况下，通过净化商业上可获得的产品获得的马心脏m霉菌蛋白也会发生可逆性变性，并且已经发现，通过在高度的水性溶液中，在5.35左右的pH下，可以通过将2 mureA共存，并通过高温降低温度的低温降低pH。 2。将肌红蛋白保持在低温变性状态在0°C的一段时间内，通过将温度迅速升高到35°C引起的自然结构形成过程，然后是温度跳跃质子NMR。结果，发现整个多肽链几乎同时又是同时倒置的。 30分钟后保持在0°C时，平均时间常数为210秒。在低温修饰状态下的保留时间内，高阶结构的形成速率存在。这表明冷变性中至少有两个州。 3。在此观察到的肌红蛋白的高阶结构的形成是由与血红素相互作用引起的。据信，在完成高阶构象之前，在血红素和凋亡蛋白之间形成了某些关联中间体，最终结构是通过多个步骤形成的，但是到目前为止，无法确定此类中间体的光谱。 4。上面描述的实验使我们能够建立适用于温度跳跃NMR的实验系统和实验条件。将来，我们计划研究使用高速温度跳跃NMR检测器在快速过程中形成的多维结构中间体。