Pー450_<11β>による反応の多様性と多段階反応

P-450_<11β>引起的反应多样性和多步反应

• 批准号: 02217206
• 负责人: 須原 克子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02217206/
• 关键词: Pー450; Pー450_<11β>; ステロイド18位水酸化反応; ステロイド11β位水酸化反応; ステロイド18位酸化反応

本研究はブタ副腎皮質ミトコンドリアの精製Pー450_<11β>を用い、触媒する反応の多様性と多段階反応の機構をすべて精製酵素タンパク質(アドレノドキシン、アドレノドキシン還元酵素)による再構成系によって酵素次元で解析したものである。Pー450_<11β>はC_<21>ーステロイドであるデオキシコルチコステロン、11ーデオキシコルチゾ-ルの11βー位を水酸化し、グルココルチコイドであるコルチコステロンとコルチゾ-ル生成するが、コルチコステロンの18位をさらに水酸化、酸化しミネラロコルチコイドであるアルドステロンを生成することが明らかになっている。このことから、Pー450_<11β>は、コルチゾ-ルの18位の水酸化、酸化も触媒し18ーヒドロキシンーおよび18ーオキシ体を生成することが予想される。そこで、精製Pー450_<11β>を用いてこれらのステロイドの生合成機構を調べることを目的とした。11ーデオキシコルチゾ-ルまたはコルチゾ-ルを基質としてPー450_<11β>と反応系を再構成し、一定時間反応させ抽出したステロイドをHPLC、TLCで分析した。得られた2つの未知の生成物はNMR、GCーMSにより18ーヒドロキシーおよび18ーオキソコルチゾ-ルと同定された。さらに、11ーデオキシコルチゾ-ルからは、18ーヒドロキシー11ーデオキシコルチゾ-ルも同定され、11ーデオキシコルチゾ-ルを出発としたPー450_<11β>の多段階反応による代謝経路が明らかになった。これらのステロイドは原発性アルドステロン症の要因ステロイドとして注目され、18ーオキソコルチゾ-ルはアルドステロンの1%のミネラロコルチコイド活性、コルチゾ-ルの3%のグルココルチコイド活性をもつstructural hybrid steroidといわれている。組織スライスを用いた実験により副腎で合成されることが示唆されていたが、本研究はPー450_<11β>がこれらのステロイドの生合成反応に関与していることを明らかした。

这项研究使用了猪肾上腺皮质线粒体的纯化P-450_<11β>，并分析了使用纯化的酶蛋白（肾上腺素毒素，肾上腺素毒素还原酶）使用纯化的酶尺寸的催化反应的多样性以及酶尺寸中多阶段反应的机制。 p-450_<11β>羟基氧化物C_ <21>类固醇脱氧核苷和11-脱氧核酸的11β位置，并产生糖皮质激素皮质酮和皮质醇，但它已显示出它进一步羟基氧化物，并氧化了18ththecortors ander蛋白酮，从而产生了CORTOSTORTORT，从而使Coritersores and soster蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白均产生。由此，可以预期P-450_<11β>还催化了皮质醇18位的羟基化和氧化，以产生18-羟基和18氧化物。因此，目的是使用纯化的P-450_<11β>研究这些类固醇的生物合成机制。使用11-脱氧皮质醇或皮质醇作为底物将反应系统用P-450_<11β>重构，然后将类固醇反应一定时间，然后提取。通过NMR，GC-MS将获得的两种未知产物鉴定为18-羟基和18-氧化菌醇。此外，还鉴定出18-羟基-11-脱氧皮质醇，揭示了P-450_<11β>多步反应引起的代谢途径。这些类固醇吸引了原发性醛固酮含量的因子类固醇，据说18-氧化菌醇是一种结构性杂化类固醇，具有1％的醛固酮矿物皮质激素活性和3％的糖皮质激素活性。尽管使用组织切片的实验表明它是在肾上腺中合成的，但这项研究表明，P-450_<11β>参与了这些类固醇的生物合成反应。

项目成果

Hideo Mochizuki,Katsuko Suhara,Masayuki Katagiri: "Adrenal Pー450scc Catalyzes Deoxycorticosterone 6βーHydroxylase Reaction" Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 37. 133-136 (1990)

Hideo Mochizuki、Katsuko Suhara、Masayuki Katagiri：“肾上腺 P-450scc 催化脱氧皮质酮 6β-羟化酶反应”类固醇生物化学和分子生物学杂志 37. 133-136 (1990)。

Katsuko Suhara,Minoru Yamamoto,Masayuki,Katagiri: "Hydroxylation of 19ーNorandrostenedione by Adrenal Cortex Mitochondrial Pー450_<11β>" Journal of Steroid Biochemistry. 36. 361-367 (1990)

Katsuko Suhara、Minoru Yamamoto、Masayuki、Katagiri：“肾上腺皮质线粒体 P-450_<11β> 的 19-去甲雄烯二酮的羟基化”类固醇生物化学杂志 36. 361-367 (1990)。