イワヅタにおける微小管の滑り機構の解明

阐明常春藤的微管滑动机制

基本信息

批准号：
01657507
负责人：
黒田清子
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01657507/
关键词：
イワヅタ原形質流動微小菅ダイニン滑り運動

项目摘要

真核細胞のベン毛・せん毛運動をはじめ、神経軸索内の輸送や巨大アメ-バ-の糸状仮足内の流動など、多くの細胞運動に微小管-ダイニン系が関与することが知られている。しかし植物細胞内の原形質流動の原動力発生にはアクトミオシン系が働いていると考えられて来た。微小管の関与する植物細胞内での原形質流動は、本研究者らの報告したイワヅタ以外知られていない。本研究はイワヅタの原形質流動における微小管の滑りの分子機構を明らかにすることを目的とする。海産の緑藻イワヅタ(Caulerpa)の細胞の中では活発な多条型原形質流動(3μm/sec)がみられる。この流動はサイトカラシンBで全く阻害されないが、コルヒチンで完全に停止する。また、EHNAで濃度依存的に阻害を受ける。更に電子顕微鏡による観察からイワヅタの原形質流動の原動力の発生にチュ-ブリン-ダイニン系が関与することが強く示唆された。イワヅタからダイニンを抽出する試みは、本研究者らが数年来種々の方法を試みたが、植物細胞特有の強い蛋白質分解酵素に阻まれて、成功していない。今回は、イワヅタをTCA中で切開裂し、液胞中の蛋白質分解酵素を瞬時に不活性化して後、SDS-PAGEにかけると高分子領域に数本のペプチドを検出することができた。現在この高分子領域のバンドの抗ダイニン抗体によるブロッティングを試みている。また、100kd-200kdの間にも数本のバンドを検出することができた。これらの中に、ダイニン以外の、微小管依存性のトランスロ-ケ-タ-が存在するか否かをしらべることも早急の課題である。次に石崎らの方法を用いて、ダイニン様蛋白質の抽出、精製に是非とも成功したい。更にイワヅタのダイニンに対する抗体を作成し、抗体による流動の阻害を検討する。

众所周知，微管 - 二氧蛋白系统参与了许多细胞运动，包括真核细胞的运动，神经轴突内的运输以及巨型糖果家的丝状运动中的流动。但是，人们认为肌动球蛋白系统正在发挥作用，以产生植物细胞内血浆流的驱动力。除研究人员报道以外，涉及微管的植物细胞内的血浆流量是未知的。这项研究旨在阐明常春藤血浆流中微管滑动的分子机制。在海洋绿藻的细胞中观察到活跃的多毛原生质流（3μm/sec）。这种流程根本不受细胞链霉素B的抑制作用，而是用秋水仙碱完全阻止。此外，EHNA依赖于浓度。此外，电子显微镜观察结果强烈表明，结核素 - 二氧蛋白系统参与了常春藤血浆流动的驱动力的发展。研究人员尝试了从常春藤中提取动力蛋白的各种方法，但由于植物细胞独有的强蛋白水解酶，但由于没有成功。这次，在TCA中裂解常春藤，立即将液泡中的蛋白水解酶灭活，然后进行SDS-PAGE进行检测以检测聚合物区域中的几种肽。目前，我们正在尝试用抗二涅抗体在该聚合物区域中擦拭频段。此外，在100kD至200 kd之间检测到了几个频段。确定在其中是否有微管依赖性转运剂也是一项紧迫的任务。接下来，我们希望使用Ishizaki等人的方法成功提取和纯化类似动力蛋白样蛋白。此外，制备了来自常春藤蛋白的动力蛋白的抗体，并研究了抗体对流量的抑制。