イワツダにおける微小管の滑り機構の解明

阐明岩津田的微管滑动机制

基本信息

批准号：
02239209
负责人：
黒田清子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02239209/
关键词：
滑り運動ダイニン微小管原形質流動イワヅタ

项目摘要

本研究は、海産の巨大緑藻イワヅタ(Caulerpa)の原形質流動における微小管の滑りの分子機構を明らかにすることを目的とする。イワヅタの細胞内には100本前後の微小管の巨大な束が多数存在し、各微小管の間、および微小管と細胞小器官の間には、23nmの間隔で周期的に並ぶクロスブリッヂが観察される。このクロスブリッヂにダイニン様蛋白質が含まれていることを示唆する結果を本研究者らは得ている。本年度は、イワヅタの粗抽出液中に、ウニ精子ダイニン重鎖とSDSーPAGEで移動度を同じにするペプチドを検出することができた。このバンドを切り出し、抗体を作製した。現在、この抗体および抗ウニ・ダイニン抗体を用いて、ブロッティングによる高分子領域バンドの同定を行っている。また100kdー200kdの間にも数本のバンドを検出することができた。それらの中にダイニン以外の、微小管依存性のトランスロ-ケ-タ-が存在するか否かを確かめつつある。またダイニン様蛋白質の抽出・精製に努力している。一方、イワヅタの細胞モデル系を用いて、VanadateとATPの存在下でのUVー照射による流動の阻害、および上記抗体による流動の変化を検討中である。イワズタの流動において、細胞小器官と微小器の間の滑りのみでなく微小管同士の滑りが“おんぶ効果"として働いているか否かを、<in>___ー <vitro>___ーに取り出したイワズタの微小管束を用いて明らかにしようとしている。このためには、細胞内での個々の微小管の極性を決定することも早急の課題である。

本研究的目的是阐明海洋巨型绿藻 Caulerpa 等离子流过程中微管滑移的分子机制。常春藤细胞内有许多约100个微管的巨大束，在每个微管之间以及微管与细胞器之间可以观察到以23 nm的间隔周期性排列的横桥。研究人员获得的结果表明，这种横桥含有一种动力蛋白样蛋白质。今年，我们能够在常春藤粗提物中检测到与海胆精动力蛋白重链具有相同迁移率的 SDS-PAGE 肽。将该条带切除并产生抗体。目前，我们正在使用该抗体和抗海胆动力蛋白抗体通过印迹法鉴定高分子区域条带。我们还能够检测到 100kd 到 200kd 之间的几个条带。我们目前正在确认其中是否存在除动力蛋白之外的微管依赖性易位蛋白。我们也在努力提取和纯化动力蛋白样蛋白。另一方面，使用常春藤细胞模型系统，我们正在研究在钒酸盐和ATP存在下紫外线照射对流动的抑制，以及上述抗体对流动的变化。在岩津田的流动中，我们不仅研究了细胞器和微管之间的滑动，而且还研究了微管之间的滑动是否起到“搭载效应”的作用，我们试图利用岩津田的微管束来阐明这一点。为此，确定细胞内单个微管的极性是一项紧迫的任务。