発生早期におこる標的非依存性運動神経細胞死の機序の解明

阐明发育早期发生的目标独立运动神经元死亡的机制

基本信息

批准号：
09280203
负责人：
八木沼洋行
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280203/
关键词：
p75 NGF C-JUN カスパーゼ Bcl-2 ニワトリプログラム細胞死アポトーシス

项目摘要

本研究では、ニワトリの頚髄前角で孵卵4日から5日にかけて起こる神経細胞死において死ぬべき細胞がどのようにして決定されるのか、また、細胞死の実行機序としてはどのような分子メカニズムが働いているのかを明らかにすることを目的とし、(1)生き残る細胞と死ぬ細胞とを分ける何らかの分子マーカーはないか検索する(2)細胞死関連分子の影響を調べるの2点について研究を行なった。(1)trkA,trkB,trkCおよびp75に対する免疫組織化学を細胞死の起こる直前の時期(孵卵3.5-4日)に行なった。GDNFのレセプタであるretについては、ジゴキシゲニン標識のRNAプローブを作製しin situ hybridizationを行なった。これらの結果、trkA,trkB,trkCについてはいずれも細胞死の開始時期直前には特異的な発現は見られなかった。低親和性NGFレセプター(p75)とretは前角全域に強い陽性反応が見られたが、各細胞間に大きな違いは見られなかった。p75の強い発現が見られたことからp75やNGFの機能阻害抗体を投与して細胞死への影響を検討したが、有意の影響は見られなかった。このほか、検索の結果、c-JUNがこの頚髄の細胞死の極早期のマーカーとしてTUNEL反応より優れていることが明らかとなり、今後の応用が期待される。(2)細胞死抑制機能をもつBcl-2をアデノウイルスベクタを用いて強制発現させた。孵卵3.5日の頚髄腹側にウイルス液を注入し、4.5日に固定したところ、注入部位に遺伝子発現が認められた。しかしながら、発現の割合は3-40%程度にとどまり、定量的な作用の評価はできなかった。またIL-1β変換酵素(ICE)ファミリー(カスパーゼ)の関与を調べるため、細胞死が起きている部位を実体顕微鏡下に切り出して蛋白を抽出し、各カスパーゼに特異的な基質の分解量をはかることにより酵素の活性を測定した。この結果、DEVDを特異的に分解するカスパーゼ3様の活性が部位特異的、時期特異的に頚髄前角領域で上昇していることが明らかとなった。現在、外植体培養の系で各カスパーゼ阻害剤の影響を調べている。

在这项研究中，在宫颈脊髓中的宫颈索中发生的神经细胞死亡中的细胞如何死亡，以及细胞死亡的哪些分子是细胞死亡的机理。阐明该机制是否有效，搜索一些分子标记，这些分子标记和垂死的细胞（2）检查了与细胞死亡相关的分子的影响。（1）在细胞死亡之前进行TRKA，TRKB，TRKC和P75的免疫化学（孵化3。5-4天）。对于GDNF接收器的RET，进行了具有Gigoxygoxynagin符号的RNA探针，并进行了原位杂交。这些结果表明，在细胞死亡开始之前，TRKA，TRKB和TRKC没有具体的表达。低母友好的NGF受体（P75）和RET在整个前角有强烈的正反应，但是每个细胞之间没有重大差异。由于p75的强烈表达，对p75和NGF功能抗体进行了检查以检查对细胞死亡的影响，但没有看到显着影响。此外，由于搜索，很明显，C-Jun优于Tunel反应，作为该颈椎死亡的非常早期的标志物，预计将来会应用。（2）使用腺病毒载体强行表达了具有细胞死亡抑制功能的Bcl-2。将病毒溶液注入3.5天的宫颈细胞侧，并固定为4.5天，并在注射部位观察到基因表达。但是，表达的比例仅为3-40％，无法评估定量作用。此外，为了检查IL-1β转化酶（ICE）家族（冰）家族（casperase）的参与，在物质显微镜下切除了细胞死亡发生的部分，蛋白质是提取，底物的量特定于每个casperase。结果，据揭示了Casperze 3的活性（特别拆卸DevD）在颈脊髓区域是特异性的。目前，我们正在研究每个kasperase抑制剂在外植物培养系统中的影响。