培養ヒトアストロサイトにおけるアルファBクリスタリンの発現・燐酸化誘導の検討

培养的人星形胶质细胞中 α B 晶状体蛋白表达和磷酸化诱导的检查

基本信息

批准号：
09276225
负责人：
佐藤準一
金额：
$ 0.83万
依托单位：
佐賀医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09276225/
关键词：
アルファBクリスタリンアストロサイト

项目摘要

[平成9年度研究成果]目的:低分子量ストレス蛋白質であるアルファBクリスタリン(alpha B-crystallin;αBCL)は、中枢神経系では主としてアストログリア(astroglia;AST)で構成的に発現されている。多系統萎縮症・Alexander白質ジストロフィー症など特殊な病態では、異常燐酸化されたαBCLが細胞質封入体を形成し蓄積する。現在までヒトASTにおけるαBCL発現誘導・燐酸化の細胞生物学的意義は十分解明されていない。本研究では「ヒトASTにおいてαBCL燐酸化がストレス・細胞増殖因子・サイトカインによって調節され、これらの細胞内シグナル伝達因子として機能する」との仮説を考案し、その検証を目的とする。方法・結果:ヒト胎児脳由来ASTはProf.Seung U.Kim,University of British Columbia,Canadaから分与承諾を得たが、供給待機状態なためヒトアストロサイトーマ細胞株U-373MGを用いて1D Western blot analysisで23kDaのαBCLの構成的発現を確認した。さらにαBCLのセリン燐酸化に関しては、特異抗体による免疫沈降法と抗フォスフォセリン特異的モノクロナール抗体によるnon-radioactive 2D Western blot analysisで検出できるか検討中である。これら一連の実験過程で、ヒト神経細胞・グリア細胞におけるプリオン蛋白質(prion protein;PrP)発現・PrP高次構造変換におけるストレス蛋白質の役割に関し、新知見を得たので報告した。すなわちヒト神経系細胞はサイトカイン受容体遺伝子を発現し、PrP遺伝子発現が細胞特異的にサイトカインによって制御されていること、PrP遺伝子欠損細胞においてもHSP25,HSP60,HSC70,HSP72,RSP105のheat-inducible and constitutive expressionは保持されることを見い出した。

[1997年研究结果] 目的：αB-晶状体蛋白（αBCL）是一种低分子量应激蛋白，主要在中枢神经系统的星形胶质细胞（AST）中组成型表达。在特殊的病理条件下，如多系统萎缩和亚历山大脑白质营养不良，异常磷酸化的αBCL形成并积聚在细胞质内含物中。迄今为止，人类 AST 中 αBCL 表达诱导和磷酸化的细胞生物学意义尚未完全阐明。在本研究中，我们提出了“人类 AST 中的 αBCL 磷酸化受到应激、细胞生长因子和细胞因子的调节，并作为细胞内信号转导因子发挥作用”的假设，旨在验证该假设。方法/结果：人胎儿脑源性 AST 获自加拿大不列颠哥伦比亚大学 Seung U. Kim 教授，但由于供应处于备用状态，因此使用人星形细胞瘤细胞系 U-373MG 获得 1D 组成型表达。通过蛋白质印迹分析证实了 23kDa αBCL。此外，关于αBCL的丝氨酸磷酸化，我们目前正在研究是否可以通过使用特异性抗体的免疫沉淀和使用抗磷酸丝氨酸特异性单克隆抗体的非放射性2D蛋白质印迹分析来检测它。通过这一系列的实验，我们报告了关于应激蛋白在人类神经元和神经胶质细胞中朊病毒蛋白（PrP）表达和PrP构象转化中的作用的新发现。换句话说，人类神经系统细胞表达细胞因子受体基因，PrP基因表达受细胞因子以细胞特异性方式控制，甚至在PrP基因缺陷的细胞中，HSP25、HSP60、HSC70、HSP72和RSP105也是热诱导的我们发现本构表达被保留。