アルツハイマー病「プロテオグリカン仮説」の検証:老化脳のプロテオグリカン

验证阿尔茨海默病的“蛋白多糖假说”：衰老大脑中的蛋白多糖

基本信息

批准号：
05261218
负责人：
大平敦彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.幼若ラット脳におけるプロテオグリカン型アミロイド前駆体蛋白の検出老人斑の主成分であるアミロイドbeta蛋白の前駆体(APP)は、正常脳にも存在することが知られており、その詳細な構造や正常脳における機能についても興味が持たれている。私達は、生後10日のラット脳から得られる可溶性プロテオグリカン画分中に、抗APP抗体を用いたウェスタンブロットにより、150kDa前後の巾広いバンドを与える物質を検出した。この分子は、コンドロイチナーゼ消化により105kDaの単一バンドに変化したことから、コンドロイチン硫酸を結合したAPPであることが分かった。このようなプロテオグリカン型APPは、ラット胎仔脳より調製した初代培養グリア細胞の培養液にも検出されたが、神経細胞の培養液には検出できなかった。以上の結果は、分化途上の脳には、おもにグリア細胞が分泌したプロテオグリカン型APPが存在し、脳の発達に何らかの役割を果たしていることを示唆している。2.モノクローナル抗体を用いた脳特異プロテオグリカンの同定私達は、ラット脳由来のプロテオグリカンを免疫原としてモノクローナル抗体を作製することにより、これまでに、3種類の新奇な可溶性プロテオグリカンを発見した。本年度は、脳の膜結合性プロテオグリカンを認識するモノクローナル抗体の作製を試みた。その結果、140kDaのコア糖蛋白を持つヘパラン硫酸プロテオグリカンを認識する抗体、および125kDaのコア糖蛋白を持つコンドロイチン硫酸プロテオグリカンを認識する抗体を得た。免疫組織化学により、前者(growthcanと仮称)は、伸長しつつある神経突起に発現していることがわかった。一方、前者(neuroglycan-C)は、神経回路網形成期の脳における神経細胞の細胞体周囲に発現していることが明らかとなった。この2つのモノクローナル抗体は、ラット以外の動物種には反応しないこともわかった。

1。在年轻大鼠大脑中检测蛋白聚糖型淀粉样蛋白前体蛋白淀粉样β蛋白（APP）的前体是正常的大脑中的主要组成部分，它也存在于正常的大脑中，并且对其在正常大脑中的详细结构和功能也很感兴趣。我们检测到通过蛋白质印迹使用抗APP抗体在可溶性蛋白聚糖的馏分中从10天大的大鼠大脑中获得的抗APP抗体，通过蛋白质印迹给出了大约150 kDa的物质。在软骨蛋白酶消化时，该分子被转化为一个105 kDa带，因此被发现与硫酸软骨素结合了应用。在由胎儿大鼠脑制备的原代神经胶质细胞的培养基中也检测到了这种蛋白聚糖型应用，但在神经元的培养基中未检测到。以上结果表明，胶质细胞分泌的蛋白聚糖型应用程序正在经历分化，并在大脑发育中起作用。 2。使用单克隆抗体鉴定脑特异性蛋白聚糖，我们通过使用大鼠脑作为免疫原子的蛋白聚糖来生成单克隆抗体，发现了三种新型的可溶性蛋白聚糖。今年，我们试图生产单克隆抗体，以识别大脑中膜结合的蛋白聚糖。结果，获得抗体，该抗体识别硫酸盐蛋白聚糖的蛋白聚糖，其核心糖蛋白为140 kDa，并识别硫酸软骨蛋白蛋白聚糖蛋白聚糖蛋白聚糖蛋白蛋白聚糖蛋白蛋白聚糖，含有125 kDa的核心糖蛋白。免疫组织化学表明，前者（暂定名称生长卡）在细长的神经突表示。另一方面，已经揭示了前者（Neuroglycan-C）在神经网络形成阶段围绕大脑的神经元细胞体表达。还发现这两种单克隆抗体对大鼠以外的动物物种没有反应。