パラミクソウイルスの転写複製信号の解析

副粘病毒转录复制信号分析

基本信息

批准号：
04271202
负责人：
塩田達雄
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

パラミクソウイルスは一本鎖で直線状のマイナス鎖RNAをゲノムとし感染細胞内で、capとpolyaのついた5つのmRNAとプラス鎖の全長RNAを合成する。ゲノムRNAの転写及び複製のためにはウイルスのRNAポリメレースの2つのsubunit(LとP)、及び鋳型となるゲノムRNAとそれを包装するヌクレオカプシド蛋白質(NP)が要求される。本研究はパラミクソウイルスの転写及び複製のための上記の因子群間の相互作用の分子的実態を明かにする事を目的とする。このため本年度は以下の研究を行った。(a)パラミクソウイルスのセンダイウイルス(HVJ)とパラインフルエンザ3型ウイルス(PIV3)は近縁のウイルスであり、NPは60%、Pは20%、Lは60%のアミノ酸が保存されている。そこで、これらの2つのウイルスの間の、NP、P、及びLの機能互換性を検討した。NPとゲノムRNAの複合体(RNP)を細胞に導入し、LやPを別々に細胞に供給する細胞内再構成系を用いた実験結果からは、2つのウイルスの間でLやPの機能互換性は認められなかったが、HVJの欠損干渉性ゲノムは、PIV3のウイルス蛋白質により子孫ウイルス中に包装され得た。これらの結果から、NPとLやPとの相互作用にはこれらのウイルス間で機能互換性がないが、ゲノムRNAとNP、P、あるいはLとの相互作用にはウイルス間で機能互換性が存在する事がわかる。(b)HVJの粒子内には、約2500分子のNP、約500分子のP、約50分子のLが存有し、ウイルス感染細胞内でもこれらの蛋白質はほぼ同じ割合で合成される。そこでワクシニアウイルスベクターを用いてNP、P、あるいはLを過剰発現させ感染細胞のNP、P、及びLの量的割合を変化させウイルスの転写複製に及ぼす影響を調べた。その結果、過剰発現したNPとLがHVJの感染直後のウイルスの転写を強く阻害する事が明かになった。

在感染细胞中，Paramyxovirues使用单链，线性，负RNA作为其基因组，并合成5个具有CAP和POLYA和全长阳性RNA的mRNA。对于基因组RNA的转录和复制，需要两个子宫（L和P）的病毒RNA聚合酶，以及需要包含它们的模板基因组RNA和核素蛋白（NP）。这项研究旨在揭示上述因子和复制丙糖病毒的因素之间相互作用的分子现实。因此，今年进行了以下研究。（a）paramyxoviruse sendai病毒（HVJ）和帕林氟乙烯型3型病毒（PIV3）是密切相关的病毒，有60％NP，20％P和60％L的保存。因此，我们研究了这两种病毒之间NP，P和L的功能兼容性。使用细胞内重构系统的实验，其中将NP和基因组RNA（RNP）的复合物引入细胞中，L和PS分别提供给细胞，显示两种病毒之间没有功能兼容，但HVJ缺陷型干扰基因组可以通过PIV3的病毒蛋白包装在后代病毒中。这些结果表明，NPS和L和PS之间的相互作用在这些病毒之间在功能上不兼容，但是在基因组RNA与NP，PS或L之间相互作用的病毒之间存在功能兼容。（B）（B）大约有2,500 NP，大约500 ps，大约500 ps，并且在HVJ颗粒中大约有50 l分子，并且在近似于HVJ颗粒中的质量均具有同步性，并且构成了构成的合成，并构成了构成的质量，并且构成了构成的质量，并且构成了构成的质量，并且构成了构成的质量，并且构成了构成的质量构成。细胞。因此，疫苗病毒载体用于过表达NP，PS或L，并改变感染细胞中NP，PS和L的定量比例，并研究对病毒转录复制的影响。结果，发现过表达的NP和LS在感染HVJ后立即强烈抑制病毒转录。