蛋白質工学を活用した鉄・硫黄酸化遷元中心を持つ蛋白質の分子デザイン

利用蛋白质工程对具有铁和硫氧化中心的蛋白质进行分子设计

基本信息

批准号：
04225213
负责人：
長谷俊治
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04225213/
关键词：
フェレドキシ [2Fe-2S]クラスター酸化遷元電位

项目摘要

植物型フェレドキシン(Fd)の遺伝子を操作して作製したFd改変体の物性を物理化学的、生化学的に解析し、以下の知見を得た。1.鉄・硫黄クラスター近傍に位置するS39,G43,S46及びG50を部位特異的塩基置換法で他の種々のアミノ酸に改変し、G43改変体以外の分子種は、クラスターを備えたポロ型Fdとして大量に調製した。2.元の野性型分子の酸化遷元電位は-345mVであったが、改変体のそれらは-301から-378mVの間で変化していた。3.クラスター由来の可視部の吸収スペクトルも明瞭に変化していた。4.Fd-NADP^+遷元酵素との電子伝達活性は、改変体の酸化遷元電位にほぼ対応してNADPHからの電子の受けとる効率が増大した。5.上記の改変残基の分子進化上で保存されている重要な残基であるので、改変のもたらすFdの物性変化を熱安定性に基づいて解析した。G50の改変体は約5℃の変性温度の下降が認められたが、他の大部分の改変体にい大きな変化は認められなかった。6.現在、クラスター近傍の残基に加えて,Fd-NADPH^+遷元酵素との相互作用部と推定される領域を改変した分子を作製中であり、Fdとこの酵素との相互認識機構を目指している。

通过对植物型铁氧还蛋白（FD）操纵基因产生的FD变体的物理特性进行了物理和生化的分析以获得以下发现。 1。S39，G43，S46和G50位于铁/硫簇附近的1。S39，G43，S46和G50通过位点特异性碱基取代方法将其改装为其他各种氨基酸，除G43变体以外的其他分子物种以大量的质量为Polo-type FDS，并用簇制备了簇。 2。原始野生型分子的氧化转变电位为-345MV，但变体的氧化型在-301和-378MV之间变化。 3。从集群得出的可见切片的吸收光谱也明显变化。 4。具有FD-NADP^+转化酶的电子转移活性提高了从NADPH接收电子的效率，几乎对应于该变体的氧化过渡势。 5。由于它是上述修饰残基的分子演化中保守的重要残基，因此根据热稳定性分析了由修饰引起的FD的物理特性。观察到G50的变性温度降低了约5°C，但在大多数其他变体中未观察到重大变化。 6。目前，除了群集附近的残基外，我们目前正在创建分子，这些分子已改变了被认为是FD-NADPH^+转化酶的相互作用区域的区域，并旨在在FD和该酶之间建立相互识别机制。