アクチン結合蛋白質コフィリンとトロポニンによる平滑筋細胞の形態と機能の調節

肌动蛋白结合蛋白肌丝蛋白丝切蛋白和肌钙蛋白对平滑肌细胞形态和功能的调节

基本信息

批准号：
03268207
负责人：
大日方昂
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、平滑筋に存在するアクチン結合蛋白質(コフィリンとトロポニン)について、細胞内の振舞い、分子の構造特性などを解明し、平滑筋の構造と機能の制御の理解に寄与することを目的とした。1.平滑筋で発現されるコフィリンについてニワトリ平滑筋、脳、骨格筋の蛋白質抽出物を二次元電気泳動とイムノブロット法を組み合わせて調べたところ、どの組織でも分子量、等電点が等しい単一のコフィリンが検出された。コフィリンの発現量は平滑筋で特に多量に見られた。一方、ラットでは脳と骨格筋のコフィリンは二次元電気泳動法で区別され、非筋型と骨格筋型アイソフォ-ムの存在が明らかになった。血管平滑筋には骨格筋型が検出された。培養平滑筋細胞(ラット大動脈由来A7r5細胞)内でコフィリンはミオシンを含む繊維状構造に存在することが免疫細胞化学的に確認された。コフィリンはDMSO処理を受けた細胞で核内移行し、一次構造上で核局在化シグナル構造(PEEI/VKKRKKAV)が推測された。この配例が実際に機能するか否かを実験的に検証するために、この構造をもつペプチド(NLS)を合成しそれにFITCー標識BSAを化学架橋し細胞内に微小注入したところ、この蛍光蛋白質は核内に移行した。このようにして、コフィリン分子内の機能をもつ核移行シグナルが同定された。2.ホヤ平滑筋トロポニンT(TNT)のcDNAの構造解析マボヤの成体平滑筋および尾芽胚尾部の横紋筋のTNTのcDNAを分離、全構造を決定した。両者の翻訳領域は全く同じであった。このことは、発生過程を通じて横紋筋と平滑筋で同一の遺伝子が発現することを示す。このアミノ酸配列は、脊椎動物TNTと81ー88%の相同性を示した。また脊椎動物TNTにみられるトロポミオシン結合部位、TNC結合部位、TNI結合部位が、ある程度保存されていた。

这项研究是为了阐明细胞的行为，分子分子的结构特征等，用于平滑肌中肌动蛋白结合的蛋白（棺材和肌钙蛋白），并有助于理解平滑肌结构和功能控制。做过。 1。在平滑肌肉中表达的鸡巴斑点，大脑和骨骼肌肉的蛋白质提取物通过将两个维度的电气化方法和imnoblot方法（分子量（等效）等效的分子量相等）来检查被检测到。由于肌肉平滑，棺材表达的量特别大。另一方面，在大鼠中，大脑和骨骼肌棺材是通过二维电泳方法区分的，揭示了存在非肌肉和骨骼异构体的存在。在血管平滑肌中检测到骨骼肌类型。免疫细胞化学被证实，棺材存在于培养平滑肌细胞（大鼠主动脉A7R5细胞）中的纤维结构中。 Cofirin在带有DMSO处理的细胞的核武器中过渡，主要结构具有核稳定的信号结构（PEEI/VKKRKKKAV）。为了检查此示例是否实际功能，将具有该结构的肽（NLS）合成，FITC -SIGN BSA被制成化学桥，蛋白质中的蛋白质已转移到细胞核中。这样，确定了棺材分子内部功能的核过渡信号。 2。喷水平滑肌肌钙蛋白T（TNT）maboya的cDNA的结构分析和尾ubumido的水平肌肉的cDNA分离，并确定整个结构。两者之间的翻译区域完全相同。这表明通过在水平冠肌和光滑肌肉中出现相同基因的出现来表达相同的基因。该氨基酸序列表明脊椎动物TNT和同源物的81-88％。此外，在某种程度上保留了脊椎动物TNT中的Tropomiosin连接位点，TNC连接位点和TNI连接位点。