筋形成過程における収縮性蛋白質の集合制御の分子機構

肌生成过程中收缩蛋白组装控制的分子机制

基本信息

批准号：
01480024
负责人：
大日方昂
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01480024/
关键词：
筋原繊維形成骨格筋アクチン cDNA アクチン調節蛋白質筋発生

项目摘要

1.幼若筋のアクチン調節蛋白質(ADFとコフィリン)の構造決定:コフィリンはpH依存的なアクチン集合制御因子、ADFはpH非依存的なアクチン脱重合因子で、ともに幼若筋で働く。これらの構造と役割をさらに理解するために、鶏胚骨格筋から得たmRNAに対するλgtllcDNAライブラリ-より各蛋白質の全アミノ酸配列に相当するcDNAを、それぞれに対する特異抗体を用いてクロ-ニング、その全塩基配列を決定した。塩基配列から知られる蛋白質の一次構造はコフィリンでは166アミノ酸残基、ADFでは165残基である。今回決定されたニワトリ骨格筋コフィリンのアミノ酸配列は、既に決定されたブタ脳のコフィリンの場合と80%のホモロジ-を示した。また両蛋白質のアクチン重合への効果には顕著な差があるにも拘らず、両者のアミノ酸配列には高い(約70%)のホモロジ-が認められた。また、両蛋白質の一次構造にはSV40T抗原でしられている核移行シグナル、トロポミオシンとの共通配列、他のアクチン結合蛋白質(ゲルゾリン、プロフィリン、フラグミン)と相同な配列が存在した。両蛋白質の機能的な違いが一次構造上のどの部位に規定されるか更に検討中である。2.筋発生過程での発現変化:ADFは筋の成熟につれその発現は低下するが、コフィリンは成熟筋でも発現は持続することがわかった。3.細胞内での蛋白質の存在パタ-ン: 蛍光抗体法により検討した。コフィリン、ADFとも通常の培養筋細胞では主に細胞質に拡散している。筋管細胞をDMSO処理すると、筋細胞質に存在したコフィリンは核内に移行しアクチンとともに顕著なロッド状構造を形成するのが認められた。さらに、コフィリンは伸長期の筋細胞の末端に集合、また熱ショックを受けた筋細胞でアクチンとともに顆粒状構造に集合など多彩な振舞をするのに対し、ADFは常に細胞質に拡散して存在した。

1。年轻肌肉的肌动蛋白调整蛋白（ADF和Cophirin）的结构测定：cophirine是pH依赖性的肌动蛋白促进控制因子，而ADF是一种非依赖性的肌动蛋白剂量因子，都是年轻肌肉。为了进一步了解这些结构和作用，与每种蛋白质的总氨基酸序列相等，是从λgtllcDNA文库到从鸡肉肌肉中获得的每种蛋白质的特殊抗体。碱序列已知的蛋白质的主要结构是棺材的166个氨基酸残基，ADF的165个残基。鸡肉骨骼肌棺材的氨基酸序列这次确定已经确定了猪脑的辅助细胞和80％的同源性。尽管两种蛋白质对肌动蛋白聚合的作用有明显差异，但两者的两个氨基酸序列被认为是高（约70％）。另外，两种蛋白质的主要结构都是SV40T抗原中的核转变信号，带有Tropomiosin的常见阵列和其他肌动蛋白结合蛋白（Gelzoline，Profilin，Flagmine）。进一步研究了两种蛋白质之间的功能差的哪一部分被定义为主要结构的哪一部分。 2。肌肉发生过程中表达的变化：ADF是成熟的，表达降低，但已经发现棺材的表达甚至在成熟肌肉中也继续。 3。细胞中蛋白质的存在：patatan：荧光抗体法。辅助蛋白和ADF都主要扩散到正常培养肌肉细胞中的细胞。当处理肌肉管细胞时，允许DMSO过渡到细胞核，形成具有肌动蛋白的显着棒结构。此外，cophilin在延长时期聚集在肌肉细胞的末端，以及各种行为，例如带有热休克的丙糖蛋白细胞在颗粒状结构中聚集，而ADF始终扩散到细胞中。