Identification of macrotranscytosis based on clarification of the molecular mechanism of transport of tissue barrier penetrating peptides

基于阐明组织屏障穿透肽转运分子机制的大转胞吞作用的鉴定

• 批准号: 22H02786
• 负责人: 伊藤 慎悟
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02786/
• 关键词: 細胞膜透過ペプチド; 組織関門; マクロピノサイトーシス; トランスサイトーシス; ドラックデリバリーシステム

今年度は、小腸透過環状ペプチドDNP（DNPペプチド）について、細胞内内在化に関わる分子の探索と同定を行った。まず、計画していた分子同定スクリーニングを実施する前に、DNPペプチドの配列から得られた分子情報をもとに推測した分子Xに関して検討を行った。Western blot法を用いた解析から、分子Xは小腸上皮細胞モデルであるCaco-2細胞に発現していることを見出した。次に、shRNAを用いて分子Xを安定遺伝子ノックダウンさせたCaco-2細胞を構築し、蛍光標識DNPペプチドの経細胞輸送解析を行った。その結果、分子Xの発現低下は、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過を有意に低下させた。また、分子Xに対する抗体を阻害剤として用いたところ、蛍光標識DNPペプチドのCaco-2細胞透過は有意に低下した。さらに、ヒト凍結切片を用いた免疫組織化学的解析から、分子Xはヒト小腸上皮細胞に局在することを見出した。以上の知見から、分子Xはヒト小腸においてDNPペプチドの経細胞輸送に関わる分子であることが示唆された。

今年，我们搜索并确定了与小肠渗透循环肽DNP（DNP肽）内在化有关的分子。首先，在进行计划的分子鉴定筛选之前，根据从DNP肽序列获得的分子信息推断分子X。使用Western印迹方法的分析表明，分子X在小肠上皮细胞模型的Caco-2细胞中表达。接下来，使用shRNA构建了稳定基因的Caco-2细胞，并对荧光标记为DNP肽的近乎稳定基因。结果，分子X表达的降低显着降低了荧光标记的DNP肽的渗透。此外，当使用抗分子X抗体作为抑制剂时，荧光标记的DNP肽的渗透显着降低了Caco-2细胞。此外，使用人冷冻切除术的免疫组织化学分析表明，分子X位于人类小肠上皮细胞上。上面的发现表明，分子X是参与人类小肠中DNP肽的跨细胞转运的分子。