Construction of animal foamy virus vector and development of enzootic bovine leukosis vaccine

动物泡沫病毒载体的构建及牛地方性白血病疫苗的研制

基本信息

批准号：
22H02500
负责人：
目堅博久
金额：
$ 10.98万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

牛伝染性リンパ腫は、牛伝染性リンパ腫ウイルス(BLV)の感染を原因とする牛の慢性致死性感染症である。畜産業の経済的被害が大きく、感染対策が難しいことから、ワクチンの実現が望まれている。1980および90年代の論文では、不活化ワクチンで2度免疫した後の中和抗体価が高い時期であれば、BLVの感染を阻止できることが報告されている。そこで本研究は、牛のフォーミーウイルスにBLV抗原を組み込むことで、中和抗体価を終生高い値で維持できるBLVワクチンの開発を目指す。本研究は、研究項目①.組換え牛フォーミーウイルスの作成、研究項目②.BLVとの組換えウイルス作成と接種プロトコルの最適化、研究項目③.牛への組換えウイルス接種で構成される。1年目である2022年度は、研究項目①と②を実施した。①については、組換えウイルスの大臣確認申請を終え、現在、組換えウイルスの作成に取り組んでいる。②については、牛フォーミーウイルス野外株を使い、マウスを使った感染実験系を構築している。マウスに牛フォーミーウイルスの感染培養細胞の上清や感染細胞自体を接種する手法を検討した結果、長期間培養した培養細胞上清を接種した場合でのみ、一部のマウスの脾臓で感染が成立することがわかった(感染28日後、PCR法による確認)。現在、感染した脾臓からの感染性ウイルスの回収とウエスタンブロット法による抗体保有状況の検討を行っている。なお、3つの遺伝子型(欧州型、米国-アジア型、第III型)については、感染性に大きな違いは認められなかった。

牛感染性淋巴瘤是由牛感染感染性淋巴瘤病毒（BLV）引起的慢性致死感染。由于对牲畜行业的经济损害很严重，并且很难采取感染控制措施，因此渴望实现疫苗。 1980年代和1990年代的论文报道说，在两次灭活疫苗的免疫接种后中和抗体滴度很高时，可以预防BLV感染。因此，这项研究旨在开发一种BLV疫苗，该疫苗可以通过将BLV抗原掺入牛的融合病毒中，从而在较高的寿命中保持中和抗体滴度。这项研究包括研究项目1。创建重组牛formi病毒，研究项目2。使用BLV创建重组病毒和接种方案的优化，以及研究项目3。将重组病毒接种到奶牛中。在2022年，第一年，研究项目1和2实施了。关于①，我们已经完成了在部长中确认重组病毒的申请，目前正在创建重组病毒。关于②，使用小鼠的感染实验系统是使用牛富含病毒的室外菌株构建的。在研究了用牛正膜病毒和感染细胞的感染培养细胞的上清液中接种小鼠本身的方法之后，发现只有在某些小鼠的脾脏中，当它们与长时间培养的培养细胞的上幼体接种时，才能在某些小鼠的脾脏中获得感染（通过PCR方法证实了很长一段时间）。目前，我们正在研究从感染的脾脏中恢复传染性病毒以及通过蛋白质印迹的抗体保留状态。另外，对于三种基因型（欧洲，美国 - 亚洲和III型），没有观察到感染性的显着差异。