Molecular mechanisms of ribosome degradation in host defense of insect cells

昆虫细胞宿主防御中核糖体降解的分子机制

基本信息

批准号：
22H02358
负责人：
池田素子
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

Autographa californica 核多角体病ウイルス（AcMNPV）のP143と相互作用するカイコ細胞因子をアフィニティー精製カラムにより探索するため，AcP143最小領域の大量発現を行った．AcP143最小領域の配列をバキュロウイルスタンパク質発現系であるバクミド（AcBac）に挿入し組換えバクミドを作成した．AcP143の最小領域と相同なカイコNPV P143（BmP143）配列についても組換えバクミドを作成した．得られたそれぞれの組換えバクミドDNAをSf9細胞にトランスフェクション法で導入することによって，AcP143最小領域およびそのBmP143相同体の発現を確認することができた．トランスフェクションした細胞培養液から組換えウイルスが得られたので，組換えウイルスをSf9細胞に感染させることでそれぞれの発現タンパク質を大量に回収し，回収したタンパク質を用いてアフィニティー精製カラムの作成を進める．これまでに，AcP143最小領域の中で6つのアミノ酸（H514，H528，V556，S564，F577，A599）がrRNA分解に関与し，Q325はAcP143最小領域の構造維持などに機能していることを示した．これらのアミノ酸が異常タンパク質の形成に関わり，そのストレス応答としてrRNA分解が誘導されている可能性がある．そこで，BmP143最小領域のQ326，V529，T600（AcP143のQ325，H528，A599に相当）の各アミノ酸を置換し，異常構造をとらせることによってrRNA分解が誘導されるかを調査した．その結果，今回行ったBmP143最小領域の１アミノ酸置換だけではrRNAの分解は誘導されなかった．

为了搜索与核细胞因子的搜索，与核细胞因子相互作用，该因子与P143的核多面病毒病毒（ACMNPV）相互作用，通过亲和力纯化柱，我们进行了ACP143最小区域的大量表达。将ACP143最小区域的序列插入Bacmid（ACBAC）（ACBAC），一种杆状病毒蛋白表达系统，以创建重组型杆菌。还为蚕npv P143（BMP143）序列创建了重组BACMID，该序列与ACP143的最小区域同源。通过将获得的重组BACMID DNA转染到SF9细胞中，确认了最小ACP143区域及其BMP143同源物的表达。由于重组病毒是从转染的细胞培养基中获得的，因此将重组病毒感染SF9细胞以恢复大量每种表达蛋白质，并使用回收的蛋白质制备亲和纯化柱。到目前为止，ACP143最小区域中的六个氨基酸（H514，H514，V556，S564，F577，A599）参与了rRNA降解，Q325功能可维持ACP143最小区域的结构。这些氨基酸可能参与异常蛋白质的形成，并且在应力反应中可能诱导rRNA降解。因此，我们研究了是否通过在最小BMP143区域中替换Q326，V529和T600的氨基酸（对应于ACP143的Q325，H528和A599）来诱导RRNA降解，并导致氨基酸使氨基酸造成异常良好的结构。结果，在最小BMP143区域中，单个氨基酸取代不会诱导rRNA的降解。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

AcMNPV感染カイコ細胞におけるリボソームRNAの切断部位の同定

AcMNPV 感染的蚕细胞中核糖体 RNA 裂解位点的鉴定

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
原屋正龍;池田素子;浜島りな
通讯作者：
浜島りな

カイコ細胞におけるrRNA 分解誘導に関与する核多角体病ウイルスP143 タンパク質の立体構造予測

核型多角体病毒P143蛋白参与蚕细胞rRNA降解诱导的三维结构预测

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
浜島りな;原屋正龍;池田素子
通讯作者：
池田素子

核多角体病ウイルスIE-1がカイコ細胞iap1遺伝子の発現に及ぼす影響の調査

核型多角体病毒IE-1对家蚕细胞iap1基因表达影响的研究

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
渡邊希香;山溝千尋;横山英子;石橋和大;瀬尾茂美;小杉海斗・高木圭子・藤井告・伴野豊・金児雄;大森裕介・小杉海斗・藤井告・伴野豊・金児雄;木矢剛智・子浦由大・國生龍平・金子佳樹・岩見雅史・木矢星歌;金子佳樹・國生龍平・岩見雅史・木矢剛智;河合祐作・浜島りな・小林迪弘・池田素子
通讯作者：
河合祐作・浜島りな・小林迪弘・池田素子

サクサン培養細胞における6 種の核多角体病ウイルスの感染性調査

六种核型多角体病毒在 Sakusan 培养细胞中的感染性研究