B型肝炎ウイルスの生活環に必要な小胞輸送の分子スイッチの解明

阐明乙型肝炎病毒生命周期所需的囊泡运输分子开关

基本信息

批准号：
26893011
负责人：
井上淳
金额：
$ 0.92万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893011/
关键词：
HBV Rab

项目摘要

B型肝炎ウイルス（HBV）感染は肝硬変や肝癌の原因となり、世界的な問題の一つである。HBVは感染肝細胞において宿主細胞の機能を利用して自身の複製を行っているが、未だその詳細については不明な点が多い。特に、ウイルスが細胞内に侵入した後にどのように輸送されるか、あるいはウイルス複製過程においてその構成タンパクやゲノムがどのように輸送され、組み立てられて細胞外に放出されるかについてはほとんど明らかにされていない。本研究では細胞内輸送に必要な機構がどのようにHBVに利用されているか、小胞輸送の分子スイッチと考えられている低分子量GTPaseのRabタンパク質ファミリーに注目して明らかにすることを目的とした。まず、HBV粒子を恒常的に発現しているが放出されたHBVは再感染しないHepG2.2.15細胞を用いて、HBVの放出に関与するRabタンパク質を同定することとした。61種類のRabタンパク質ファミリーに対するsiRNAライブラリーを用いて、各Rabタンパク質を個別にノックダウンし、培養上清中に放出されたHBV DNAをreal-time PCRで、HBsAgをCLIA法にて定量した。その結果、Rabタンパク質によってHBV DNAを主に変化させるもの、HBs抗原を主に変化させるもの、両者を変化させるものに分けられた。HBV DNAは主にHBV粒子を、HBs抗原はゲノムやコアを含まないHBs抗原粒子 (SVP, subviral particle) の量を反映していると考えられており、HBV粒子とHBs抗原粒子を放出させる経路が異なっていることを示していると思われた。

丙型肝炎病毒（HBV）感染是导致肝硬化和肝癌的全球问题之一。 HBV使用宿主细胞的功能在感染的肝细胞中复制自身，但仍然有许多未知细节。特别是，关于病毒进入细胞后如何运输的病毒，或在病毒复制过程中如何将其成分蛋白质和基因组在细胞外面运输，组装并释放出来。这项研究旨在阐明HBV的细胞内转运所需的机制如何使用，并专注于低分子量GTPase的Rab蛋白家族，这被认为是用于囊泡转运的分子开关。首先，我们决定使用组成表达HBV颗粒但不会重新感染释放的HBV的HEPG2.2.15细胞鉴定参与HBV释放的RAB蛋白。使用siRNA文库用于61个Rab蛋白家族，将每个RAB蛋白分别击倒，并通过实时PCR定量HBV DNA释放到培养上清液中，并通过CLIA方法对HBSAG进行定量。结果，将该组分为那些主要改变HBV DNA的rab蛋白，主要改变HBS抗原的蛋白质以及两者都会改变的蛋白。 HBV DNA被认为反映了HBV颗粒的量，而HBS抗原不含基因组或核心，表明允许释放HBV颗粒的途径不同。