緑藻クラミドモナスにおけるアグロバクテリウムを用いた遺伝子破壊系の確立

利用农杆菌在绿藻衣藻中建立基因破坏系统

基本信息

批准号：
24870016
负责人：
梶川昌孝
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-08-31 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

クラミドモナスに対する高感染性アグロバクテリウム株の選定と形質転換条件の最適化クラミドモナス細胞核中の染色体DNAにT-DNAが安定に組み込まれる条件をつきとめるため、以下の諸条件を組み合わせてアグロバクテリウム感染の最適化を試みた。a, 高感染性アグロバクテリウム菌株の選定　単子葉植物や酵母などアグロバクテリウムの宿主範囲外生物の形質転換で使用されている高感染性（supervirulent）菌株を用いて、安定形質転換体が取得できるかを調べ、最も頻度が高く薬剤耐性能を示す菌株を絞り込んだ。b, 感染に最適なクラミドモナス株と細胞ステージの決定　クラミドモナスには細胞壁が厚い系統と薄い系統が存在する。細胞壁の厚さが感染効率に影響するかを細胞壁の厚さの異なる3種類の系統（C9、5D、cw-15）を用いて検証した。しかし、細胞壁の有無は薬剤耐性個体の出現頻度に影響を及ぼさなかった。c, 適切な選抜マーカー遺伝子とアグロバクテリウムの除菌薬剤の選定　クラミドモナスの従来法による形質転換体選抜にはaph7’遺伝子（ハイグロマイシン選抜）、aphVIII 遺伝子（パラモマイシン選抜）、ble遺伝子（ゼオシン選抜）などの選抜システムが使用されている。これらの薬剤選抜系の中でアグロバクテリウム法に適したものを調べるため、各遺伝子発現カセットを既にバイナリーベクターpCAMBIA-1300に組み込み、感染実験に用いた。また、感染後のアグロバクテリウム菌体の除菌に、meropenemやmoxalactamといった新規eta-lactam系抗生物質がクラミドモナスでも効果的であることが示された。

选择高度感染性的农杆菌菌株用于衣原体和转化条件的优化，以确定在衣原体细胞核中T-DNA稳定地整合到染色体DNA中的条件，我们试图通过结合以下条件来优化农业感染的条件：a。选择高度感染性的农杆菌菌株：使用用于在农杆菌宿主范围以外转化生物体（例如单子叶植物和酵母）之外的生物体中，我们研究了是否可以获得稳定的转化剂，并缩小最常表现出耐药性的菌株。 b。确定感染衣原体的最佳衣原体菌株和细胞阶段具有厚而薄的细胞壁谱系。我们研究了使用三种不同的细胞壁厚度（C9、5D，CW-15）是否会影响细胞壁厚度是否会影响感染效率。但是，细胞壁的存在或不存在不会影响抗药性个体发生的频率。 C，选择适当的选择标记基因和农杆菌灭菌剂：选择系统，例如APH7'GENE（湿霉素选择），APHVIII基因（莫拉莫霉素选择）和BLE基因（Zeocin选择）（Zeocin选择）已用于使用chlamydomonas的常规转化体进行选择。为了研究这些药物选择系统中的哪种适用于农杆菌法，每个基因表达盒已经纳入二元载体PCAMBIA-1300中，并用于感染实验。还已经显示，新的伊特乳酰胺抗生素（如美霉素）和莫萨乳转酰胺有效地消除感染后的农杆菌细胞。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

分子育種によるスクアレンを高蓄積するクラミドモナス形質転換体の作出

通过分子育种创建高积累角鲨烯的衣藻转化体

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村　康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝;高鳥直士，西駕秀俊，西田宏記．;河野恵子;梶川昌孝
通讯作者：
梶川昌孝

緑藻クラミドモナスにおける無機炭素濃縮機構と脂質代謝

绿藻衣藻无机碳富集机制及脂质代谢

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
光合成研究
影响因子：
0
作者：
T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村　康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉
通讯作者：
福澤秀哉

FACSを用いたクラミドモナスの脂質蓄積異常変異株の単離と変異原因遺伝子の解析

使用 FACS 分离脂质积累异常的衣藻突变株并分析突变基因

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村　康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝
通讯作者：
梶川昌孝

テルペノイド生合成の初発酵素DXSを過剰発現する緑藻の作出と代謝特性の解析

过表达萜类生物合成主要酶 DXS 的绿藻的创建及代谢特征分析

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村　康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝;高鳥直士，西駕秀俊，西田宏記．;河野恵子;梶川昌孝;折井みなみ　（博士課程学生）;下山未希
通讯作者：
下山未希