プロポフォール・ケタミンが駆動する情報伝達系とセロトニントランスポーター制御機構

异丙酚-氯胺酮驱动的信号转导系统和血清素转运蛋白控制机制

• 批准号: 22K20993
• 负责人: 今村 芹佳
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20993/
• 关键词: 静脈麻酔薬; セロトニントランスポーター; PKC

１）プロポフォール・ケタミンが惹起するシグナル伝達機構の網羅的解析：プロポフォールおよびケタミンはPKCをはじめ、様々なリン酸化酵素を活性化し、様々なタンパク質のリン酸化と遺伝子発現を誘導すると考えられる。そこで、以下の実験を行っている。プロポフォールおよびケタミンを処理した細胞をリン酸化プロテオミクスに供し、プロポフォールが誘導するリン酸化タンパク質を網羅的に検索した。それらのタンパク質として血管痛の原因候補としてNO合成酵素、TRPチャンネル、麻酔薬効果発揮の候補としてTREK-1などのイオンチャンネル、また抗うつ薬発揮作用に関して、SERTなどを想定している。リン酸化プロテオミクスは、研究協力者とともに施行しているところである。また、同様に処置した細胞をRNA-sequenceに供し、発現が変動する遺伝子を網羅的に解析する予定である。２）プロポフォール・ケタミンによるSERTの機能調節機構の解析：一般的に、細胞膜に発現するSERT機能のダウンレギュレーションが、シナプス間隙でのセロトニン増加を促し、抗うつ薬作用の発揮に繋がると考えられている。そのため、プロポフォールおよびケタミンがSERTに及ぼす影響を解明するために以下の実験を行う予定である。遺伝子導入によりSERTを一過性・安定発現させたCOS-7細胞・HEK293細胞を用いて、セロトニン取り込み活性に対する、プロポフォールおよびケタミンの影響を検討する。単位タンパク質量あたりのトリチウム・セロトニンの取り込みを測定し、セロトニン取り込み活性とする。

1）综合分析异丙酚和氯胺酮诱导的信号转导机制：异丙酚和氯胺酮被认为可以激活包括PKC在内的多种磷酸化酶，诱导多种蛋白质和基因表达的磷酸化。因此，我们正在进行以下实验。对丙泊酚和氯胺酮处理的细胞进行磷酸化蛋白质组学，全面寻找丙泊酚诱导的磷酸化蛋白。在这些蛋白质中，NO合酶和TRP通道被认为是引起血管疼痛的候选蛋白，TREK-1等离子通道是发挥麻醉作用的候选蛋白，SERT被认为具有抗抑郁作用。目前正在与研究合作者一起开展磷酸化蛋白质组学研究。我们还计划对经过类似处理的细胞进行 RNA 测序，以全面分析表达变化的基因。 2）异丙酚和氯胺酮对SERT功能的调节机制分析：一般认​​为细胞膜表达的SERT功能下调促进突触间隙血清素增加，从而发挥抗抑郁作用。因此，我们计划进行以下实验来阐明异丙酚和氯胺酮对SERT的影响。我们将使用通过基因转移瞬时稳定表达 SERT 的 COS-7 和 HEK293 细胞检查异丙酚和氯胺酮对血清素摄取活性的影响。测量每单位量蛋白质对氚和血清素的摄取并定义为血清素摄取活性。