胃がん幹細胞の単離と新規マーカーの同定及びWnt非β-カテニン経路による制御機構

胃癌干细胞的分离、新标志物的鉴定及Wnt非β-catenin通路的调控机制

基本信息

批准号：
22800047
负责人：
山本英喜
金额：
$ 2.01万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22800047/
关键词：
胃がんがん幹細胞分化 Wntシグナル非β-カテニン経路

项目摘要

本研究では(1)胃がん幹細胞の単離と特異的マーカーの同定、および,(2)胃がん幹細胞の自己複製能と分化誘導機構におけるWntシグナル非β-カテニン経路の関与を評価するため、以下の実験を行なった。1.自己複製能を有し未分化性を維持した幹細胞性を有する胃がん細胞の単離:複数のがん腫でがん幹細胞の同定法として報告のあるCD24, CD44, CD133等の細胞表面蛋白質の発現様式やHoechst33342色素の排出能力ならびにaldehyde dehydrogenase (ALDH)活性をマルチカラーFACSで評価し、これらを複数組み合わせてソーティングを行なった。また、各集団の細胞増殖や運動、浸潤能などの細胞生物学的特性を解析した。その結果、複数の胃がん細胞株でCD24陰性の細胞に幹細胞様特性があり、CD24の発現様式によりALDH活性に差があることを見出した。胃がん細胞でのCD24の発現制御機構については現在検討中である。2.胃がん幹細胞様細胞の悪性形質獲得へのWntシグナル非β-カテニン経路の関与:Wntシグナル非β-カテニン経路を活性化する代表的リガンドのWnt5aを胃がん細胞株MKN45で恒常的に過剰発現させると、細胞増殖能は変化しないが細胞運動能および浸潤能が亢進した。一方、Wnt5aの強制発現によって細胞表面蛋白質のCD24とCD133の発現に変化はなかったが、CD44強陽性の割合が減少した。胃がん幹細胞のマーカーとされるCD44は、Wntシグナル非β-カテニン経路によって負に制御される可能性が考えられた。本研究は研究代表者の海外留学転出のため本年度で廃止となるが、今後は複数の胃がん細胞株からソーティングした胃がん幹細胞様細胞に共通して発現する膜蛋白質あるいは分泌蛋白質を網羅的手法で特定し、胃がんにおけるがん幹細胞の新規マーカーの同定へと検討を進める構想である。

在本研究中，我们（1）分离了胃癌干细胞并鉴定了特异性标记物，（2）评估了Wnt信号非β-catenin通路在胃癌干细胞的自我更新能力和分化诱导机制中的参与我们做了一个实验。 1.分离具有自我更新能力和维持未分化状态的干性的胃癌细胞：CD24、CD44和CD133等细胞表面蛋白，已被报道为鉴定多种癌症中癌症干细胞的表达模式。使用多色FACS评估Hoechst33342染料排泄能力和乙醛脱氢酶(ALDH)活性，并使用这些的多种组合进行分选。我们还分析了每个群体的细胞生物学特征，包括细胞增殖、运动和侵袭能力。结果，他们发现多种胃癌细胞系中的CD24阴性细胞具有干细胞样特性，并且ALDH活性根据CD24表达模式而变化。胃癌细胞中CD24表达调控的机制目前正在研究中。 2. Wnt信号非β-catenin通路参与胃癌干细胞样细胞恶性特征的获得：在胃中组成型过表达Wnt5a，Wnt5a是激活Wnt信号非β-catenin通路的典型配体癌细胞系MKN45，细胞增殖能力没有变化，但细胞运动和侵袭能力增强。另一方面，Wnt5a的强制表达并没有改变细胞表面蛋白CD24和CD133的表达，但强CD44阳性细胞的比例减少。 CD44被认为是胃癌干细胞的标志物，可能受到Wnt信号非β-catenin通路的负向调节。由于主要研究者调往国外学习，这项研究今年将停止，但我们将使用综合方法来鉴定从多种胃癌细胞系中分选的胃癌干细胞样细胞中普遍表达的膜蛋白或分泌蛋白这个想法是继续进行研究，以确定胃癌中癌症干细胞的新标记。