歯根膜由来幹細胞による血管構造形成メカニズムの解明

阐明牙周膜干细胞形成血管结构的机制

• 批准号: 21890240
• 负责人: 大久保 直登
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890240/
• 关键词: 再生医療; 血管新生; 間葉系幹細胞; 歯根膜; 三次元培養

研究実施計画に示していたように、自身で樹立した単一の歯根膜細胞初代培養系から派生した2種類の細胞、1)血管形成能の高い細胞群と2)低い細胞群の血管形成能力の違いに着目し、この2種類の細胞間での遺伝子発現様式についてcDNAマイクロアレイを用いて網羅的に調査を行った。その結果、血管形成能力の高いもののみに優位に発現する遺伝子を"血管形成誘導能力の発現を制御すると思われる候補遺伝子"として選定を行うことに成功した。その後、マイクロアレイの結果より見出した複数の遺伝子を指標に、1)の細胞群において血管形成にかかわると思われるさまざまな刺激を行った際の各遺伝子の発現を調べた結果、特徴的な発現パターンを示す遺伝子群を見出した。興味深いことに、この遺伝子群の中には、その発現に正または負の相関関係を示すものがあり、現在ウェスタンブロットやリアルタイムPCR法などを用いて確認中である。さらに、上記においてピックアップしたモデル遺伝子の中から真の血管新生誘導遺伝子をin vitroにおいて絞り込むため、候補とした遺伝子に対するsi RNAを作成し、該当候補遺伝子のノックアウトを行うことにより血管形成が起こらなくなりうるかも現在調査中である。また、in vitro三次元血管形成誘導モデルにおいても、Tie-2遺伝子の強発現部位(血管形成性細胞)と弱発現部位(非血管形成性細胞)を見出しているが(Okubo.et.alJ.Vasc.Res.2010)、この歯根膜幹細胞による上記の2部位に対するレーザーマイクロダイセクションによる組織サンプルからのmRNAを抽出する作業を進め、さまざまな方法により、"歯根膜由来細胞の血管形成能力を制御する遺伝子"の同定を目指している。

正如研究实施方案所示，我自己建立的单一牙周膜细胞原代培养体系衍生出两类细胞：1）高血管生成能力的细胞群和2）低血管生成能力的细胞群。为了了解这两类细胞之间的差异，我们使用 cDNA 微阵列对这两类细胞之间的基因表达模式进行了全面的研究。结果，我们成功地选择了仅在具有高血管生成能力的基因中优先表达的基因作为“被认为控制血管生成诱导能力的表达的候选基因”。然后，以从微阵列结果中发现的多个基因为指标，研究了当对细胞群1)施加被认为与血管生成有关的各种刺激时每个基因的表达，并发现了特征性的表达模式。显示此内容的组。有趣的是，该组中的一些基因在表达中表现出正相关或负相关，目前正在使用蛋白质印迹和实时PCR方法证实这一点。此外，为了从上述体外提取的模型基因中缩小真正的血管生成诱导基因的范围，我们为候选基因创建了si RNA，并确定是否可以通过敲除候选基因来阻止血管生成，目前也在研究中。 。另外，在在体外三维血管生成诱导模型中，我们发现了Tie-2基因的强表达位点（血管生成细胞）和弱表达位点（非血管生成细胞）（Okubo.et.alJ.Vasc.Res..2010） , 这个牙周膜我们正在利用干细胞对上述两个部位进行激光显微切割，从组织样本中提取mRNA，并通过各种方法鉴定“控制牙周膜来源细胞的血管生成能力的基因”。

项目成果

歯根膜由来未分化間葉系細胞幹細胞による血管内皮細胞マーカー陽性血管構造の形成

牙周膜来源的未分化间充质细胞干细胞形成内皮细胞标志物阳性血管结构

• 发表时间: 2009
• 作者: 荒木信;本島清人;大久保直登;荒木信;大久保直登;荒木信;大久保直登;大久保直登;荒木信;大久保直登
• 通讯作者: 大久保直登

歯根膜由来間葉系細胞による血管内皮細胞マーカー陽性血管構造の形成

牙周膜来源的间充质细胞形成内皮细胞标志物阳性血管结构

• 发表时间: 2010
• 作者: 荒木信;本島清人;大久保直登;荒木信;大久保直登
• 通讯作者: 大久保直登

歯根膜由来幹細胞による血管内皮細胞マーカー陽性血管構造の形成

牙周膜干细胞形成内皮细胞标志物阳性血管结构

• 发表时间: 2009
• 作者: 永谷勝也;簑田清次;荒木信;大久保直登
• 通讯作者: 大久保直登

Vascular Cell-Like Potential of Undifferentiated Ligament Fibroblasts to Construct Vascular Cell-Specific Marker-Positive Blood Vessel Structures in a PI3K Activation-Dependent Manner

• DOI: 10.1159/000277724
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: JOURNAL OF VASCULAR RESEARCH
• 影响因子: 1.7
• 作者: Okubo, Naoto;Ishisaki, Akira;Kitagawa, Yoshimasa
• 通讯作者: Kitagawa, Yoshimasa

ラット歯根膜由来間葉系幹細胞によるPI3K/Akt依存的なTie-2陽性血管構造の形成

大鼠牙周膜间充质干细胞依赖 PI3K/Akt 形成 Tie-2 阳性血管结构

• 发表时间: 2009
• 作者: 荒木信;本島清人;大久保直登;荒木信;大久保直登;荒木信;大久保直登;大久保直登
• 通讯作者: 大久保直登