炎症反応におけるロイコトリエンB4受容体(BLT2)の役割

白三烯 B4 受体 (BLT2) 在炎症反应中的作用

• 批准号: 21890176
• 负责人: 佐伯 和子
• 金额: $ 1.7万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890176/
• 关键词: 免疫学; 脂質

当研究室では、世界に先駆けてロイコトリエンB4(LTB4)に対する高親和性受容体(BLT1)と低親和性受容体(BLT2)を同定した。BLTI欠損マウスでは様々な免疫反応の減弱を報告している。一方、BLT2欠損マウスはデキストラン硫酸誘導性大腸炎モデルにおいて炎症反応の亢進が観察さるものの詳細な解析は進んでいない。そこで、大腸炎発症におけるBLT2の役割を明らかにする目的で、以下の解析を行った。1、 BLT2発現細胞の解析BLT2は7回膜貫通型受容体であり、親水性の領域が短い断片に分断されているために反応性の良い抗体を作製するのは困難である。そこで、大腸組織を用いてin situ hybridizationを行ったところ、主に大腸上皮でBLT2 mRNAの発現が観察された。また、表面抗原を指標に様々な免疫細胞分画して定量PCRを行ったところ、BLT2は免疫細胞においてほとんど発現していないことが明らかになった。現在、タンパク質レベルで発現確認ができる様、モノクローナル抗体やペプチドに対するポリクローナル抗体の作製を進めている。2、 BLT2の細胞レベルでの解析大腸炎の発症には、腸内細菌によるTLR4(LPS受容体)を介した炎症性サイトカインの産生亢進が深く関与している。そこで、RAW264.7細胞を用いてLPS刺激による炎症性サイトカイン産生誘導をBLT2シグナルが抑制出来ないか検討したが、抑制活性は認められなかった。そこで、BLT2シグナルが腸上皮のバリア機能を亢進させて腸内細菌の侵入を防いでいる可能性を考え、MDCK細胞にBLT2を過剰発現させ、コンフルエント状態での蛍光色素の透過性や電気抵抗を調べたところ、タイトジャンクション形成の亢進を示唆するデータが得られた。現在その詳細なメカニズムについて検討中である。

我们的实验室是世界上第一个鉴定出白三烯B4（LTB4）的高亲和力受体（BLT1）和低亲和力受体（BLT2）的实验室。据报道，BLTI 缺陷小鼠的免疫反应减弱。另一方面，尽管在硫酸葡聚糖诱导的结肠炎模型中观察到 BLT2 缺陷小鼠的炎症反应增强，但详细的分析尚未取得进展。因此，我们进行了以下分析来阐明BLT2在结肠炎发生中的作用。 1. BLT2表达细胞分析 BLT2是七次跨膜受体，亲水区破碎成短片段，难以产生高反应性抗体。因此，当使用结肠组织进行原位杂交时，主要在结肠上皮中观察到BLT2 mRNA表达。此外，当以表面抗原为指标分级各种免疫细胞并进行定量PCR时，发现BLT2在免疫细胞中几乎不表达。我们目前正在生产针对该肽的单克隆抗体和多克隆抗体，以便可以在蛋白质水平上确认表达。 2.细胞水平上BLT2的分析肠道细菌通过TLR4（LPS受体）产生炎症细胞因子的增加与结肠炎的发病密切相关。因此，我们使用RAW264.7细胞研究了BLT2信号是否可以抑制LPS刺激诱导的炎症细胞因子产生，但没有观察到抑制活性。因此，考虑到BLT2信号可能增强肠上皮的屏障功能并阻止肠道细菌的侵入，我们在MDCK细胞中过表达BLT2并降低汇合状态下荧光染料的通透性和电阻。获得了增加的紧密连接形成。详细机制目前正在研究中。

项目成果

新規ラフト局在分子 Raftlin の免疫細胞における機能解析

Raftlin（一种新型筏定位分子）在免疫细胞中的功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 佐伯和子;福山聡;松村友美子;綾田寅之進;小林隆志;吉村昭彦
• 通讯作者: 吉村昭彦

Attenuated. Th1 induction by dendritic cells from mice deficient in the leukotriene B4 receptor 1

减弱了。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Biochimie (in press)
• 作者: Toda A;Terawaki K;Yamazaki S;Saeki K;Shimizu T;Yokomizo T
• 通讯作者: Yokomizo T