マラリア原虫の肝臓ステージ後期の寄生機序の解明

阐明疟疾寄生虫在肝脏晚期的寄生机制

• 批准号: 21890172
• 负责人: 石野 智子
• 金额: $ 1.7万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890172/
• 关键词: マラリア原虫; 肝臓ステージ; 寄生胞

蚊の吸血の際に注入されたマラリア原虫スポロゾイトが、最初に肝細胞に寄生し何千ものメロゾイトへと増殖・分化するのが人への感染の最初のステップとなる。本研究は、肝細胞におけるマラリア原虫の寄生の分子基盤の解明を目的とし、特に肝臓ステージ後期に特異的に発現する原虫タンパク(LISP1)を足がかりにして、本年度は以下の研究を実施した。肝臓ステージ後期に起きる寄生胞の崩壊に関わるLISP1蛋白の挙動を解析することで、寄生胞崩壊プロセスを解析することを目論み、ネズミマラリア原虫の一種であるP.bergheiを用いてGFPタグを融合させたLISP1を発現する遺伝子改変原虫を作出した。さらに、原虫細胞質を可視化するために生活環を通じて細胞質にRFPを発現するような遺伝子改変原虫も作出した。これらを掛け合わせることで、肝臓ステージ後期の原虫の寄生胞崩壊のタイミングをin vitroでリアルタイムに解析する準備が整う。さらに、LISP1が寄生胞崩壊に関わる機構を解明する目的で、寄生胞崩壊を担う候補プロテアーゼであるSERA1、および寄生胞膜に局在が知られるEXP1の挙動をin vitroで観察できるように、上記と同じくGFPタグを融合させた各々の蛋白を発現させる組換え原虫作成のためのコンストラクトを作成した。LISP1欠損原虫とこれらのGFPタク蛋白発現原虫を掛け合わせることで、LISP1の寄生胞崩壊における機能を解析するツールが用意できる。一方で、肝臓ステージに発現する原虫蛋白に対する抗体の準備も整った。

人类感染的第一步是蚊子吸血时注射的疟原虫子孢子首先寄生在肝细胞上，并繁殖并分化为数千个裂殖子。本研究旨在阐明疟原虫寄生于肝细胞的分子基础，特别是我们今年以肝脏晚期特异表达的原生动物蛋白（LISP1）为立足点，进行了以下研究。我们的目的是通过分析 LISP1 蛋白的行为来分析寄生液泡崩溃过程，该蛋白参与肝脏晚期发生的寄生液泡崩溃，我们创建了表达 LISP1 的转基因原生动物。此外，为了可视化原生动物的细胞质，我们创建了一种转基因原生动物，在其整个生命周期中在细胞质中表达 RFP。通过结合这些方法，我们将准备好在体外实时分析晚期肝期寄生虫的寄生虫液泡崩溃的时间。此外，为了阐明LISP1参与寄生泡塌陷的机制，我们开发了上述方法，能够在体外观察SERA1（负责寄生泡塌陷的候选蛋白酶）和EXP1的行为，EXP1是导致寄生泡塌陷的候选蛋白酶。已知定位于寄生液泡膜中，类似地，创建了用于产生重组原生动物的构建体来表达与 GFP 标签融合的每种蛋白质。通过将 LISP1 缺陷型原生动物与表达 GFP-tac 蛋白的原生动物杂交，我们可以提供一种工具来分析 LISP1 在寄生真空塌陷中的功能。同时，还制备了针对肝脏阶段表达的原生动物蛋白的抗体。

项目成果

LISP1 is important for the egress of Plasmodium parasites from liver cells

LISP1 对于疟原虫寄生虫从肝细胞中排出很重要

• 发表时间: 2009
• 作者: Tomoko ISHINO;Bertrand Boisson;Yuki Orito;Celine Lacroix;Emmanuel Bischoff;Celine Loussert;Chris Janse;Robert Menard;Masao Yuda;Patricia Baldacci
• 通讯作者: Patricia Baldacci

マラリアのほ乳類感染の成立機構を探る

探索哺乳动物感染疟疾的机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 石野智子