敗血症病態における血管内皮細胞由来細胞外小胞体のフェノタイプ解析および治療介入

脓毒症病理中血管内皮细胞来源的细胞外内质网的表型分析和治疗干预

基本信息

批准号：
18H06239
负责人：
山川一馬
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

さまざまな血球や血管内皮細胞から遊離する微小膜小胞体は、癌疾患・動脈硬化・炎症性疾患などに深く関与していることが報告されている。我々は、MPs 遊離は重症救急病態において亢進し各細胞間の伝達物質として重要な役割を担うこと、血管内皮細胞由来MPs には複数のサブタイプがありそれらの生理活性の違いと臨床像の関連を報告してきた。本研究では、敗血症や外傷などの重症救急病態において血中エクソソーム中のmicro RNAのもつ臨床的意義を明らかとすることを目的に実験を行っている。2018年度は、①エクソソーム単離ならびにmiRNA抽出手技の確立、②各種炎症病態マウスにおけるmiRNA変化についての次世代シーケンサーによる網羅的評価、の二点を行った。①エクソソーム単離・miRNA抽出手技としてはさまざまな手法を検討した結果、QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit Cat #77044を用いることに決定した。バイオアナライザーで抽出量・精度を評価し、十分に満足のいく結果であることを確認した。②12週齢雄性ラットを用いて実験をおこなった。CLP敗血症モデル、LPS全身炎症モデル、熱中症モデル、およびそれらの対照モデルを作成した。炎症極期のタイミングにおいて全採血し、上述の方法でmiRNAを抽出した。次世代シーケンサーの解析結果待ちの段階である。2019年度以降、これらの結果から選定したmiRNAをターゲットとして重症救急病態を呈する患者検体を用いた臨床的評価へと移行する予定である。

据报道，从各种血细胞和血管内皮细胞释放的小膜内质网与癌症疾病，动脉粥样硬化和炎症性疾病深深相关。我们报告说，在严重的紧急情况下，MPS释放增加，并且在细胞之间发挥了重要作用，并且血管内皮细胞衍生的MP具有多种亚型及其生理活性及其临床特征的差异。这项研究的目的是阐明在严重的紧急情况下（例如败血症和创伤）中微RNA在血液外泌体中的临床意义。在2018财年中，进行了两个点：1）建立外泌体分离和miRNA提取技术，以及2）使用下一代测序仪在各种炎症病理条件下对小鼠中miRNA变化的全面评估。 1）在检查了外部分离和miRNA提取的各种技术之后，我们决定使用Qiagen Exorneasy血清/等离子体MIDI KIT CAT＃77044。使用生物分析仪评估提取量和准确性，以确认结果令人满意。 ②实验是使用12周龄的雄性大鼠进行的。 CLP败血症模型，LPS系统性炎症模型，中风模型以及为其控制模型。在极端炎症阶段收集了整个血液，并使用上述方法提取miRNA。这是下一代测序仪正在等待的分析结果的阶段。从2019年开始，该公司计划使用表现出严重紧急情况的患者标本进行临床评估，以从这些结果中选择的miRNA。