魚類特有の器官「ヒレ」を活用した細胞内寄生細菌に対する細胞性免疫機構の解明

利用鱼类特有的器官鳍阐明针对细胞内寄生细菌的细胞免疫机制

基本信息

批准号：
18H06022
负责人：
松浦雄太
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ブリ類において細胞性免疫を担う細胞を識別するための抗体を作製した。はじめに、ブリ白血球由来cDNAより細胞性免疫を担う細胞であるヘルパーT細胞およびキラーT細胞にそれぞれ特異的に発現するCD4およびCD8分子に対する遺伝子を単離した結果、CD4分子のホモログとしてCD4-1およびCD4-2、CD8分子のアイソフォームとしてCD8αおよびCD8βの計4遺伝子の単離に成功した。なお、本研究で単離した遺伝子は、これまでブリにおいて未報告の分子であった。次に、抗体作製に使用する免疫原を作製するため、CD4およびCD8分子を安定的に発現する細胞の作製を行った。単離した遺伝子をマウス由来細胞にそれぞれ一過的に強制発現させた結果、全ての遺伝子が膜タンパク質として翻訳されることを確認した。強制発現させた細胞は継代培養し、安定発現株の作製に用いた。このうち、安定細胞株の樹立に成功したのはCD4-1、CD4-2、CD8βの3分子であった。作製した安定細胞のうちCD4-1もしくはCD8β発現細胞をマウスに免疫し、定法に従い各分子に対するモノクローナル抗体の作製を行った。ブリ末梢血白血球を用いて抗体を産生するハイブリドーマの単クローン化を行った結果、生きたブリ白血球を認識する抗体の作製に成功した。現在、作製した抗体がCD4-1もしくはCD8βを正確に認識するかについて確認を行っている。

在这项研究中，生成抗体以鉴定负责细胞介导的Yellowtail免疫力的细胞。首先，我们分离了CD4和CD8分子的基因，这些基因在辅助T细胞和杀手T细胞中特异性表达，负责细胞介导的免疫的细胞，从黄尾白细胞衍生的cDNA中，因此，我们成功地隔离了四个基因：CD4和CD4-2的CD4和CD8分子的CD4和CD8 r.cd8 s as cd8 as as ass as is cd8 as as as as cd8 as as as cd8 as as as cd8 as as as cd8 as as as cd8。在这项研究中分离的基因以前是黄尾巴中未报告的分子。接下来，为了产生用于生产抗体的免疫原，制备了稳定表达CD4和CD8分子的细胞。由于在小鼠衍生细胞中瞬时强行表达了分离的基因，因此证实所有基因均被翻译为膜蛋白。将强制表达的细胞进行亚培养，并用于产生稳定的表达菌株。其中，成功建立稳定细胞系的三个分子是CD4-1，CD4-2和CD8β。在产生的稳定细胞中，用CD4-1或表达CD8β的细胞免疫小鼠，并根据标准方法制备针对每个分子的单克隆抗体。由于杂交瘤的单克隆促成，这些杂交瘤使用外周牛血清细胞产生抗体，我们成功地产生了识别活的Yellowtail白细胞的抗体。当前，我们正在检查产生的抗体是否准确识别CD4-1或CD8β。