切除標本からの門脈系exosome解析による大腸癌肝転移ハイリスク群選別法の発明

发明利用切除标本门静脉系统外泌体分析高危结直肠癌肝转移群体选择方法

• 批准号: 16H07055
• 负责人: 貞苅 良彦
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-08-26 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H07055/
• 关键词: exosome; 大腸癌肝転移; 門脈血; 早期診断; 門脈系血液中マーカー解析; DNA解析; タンパク解析

まず門脈系血清のサンプル採取を行った。平成28年4月から大腸癌手術症例の摘出検体の下腸間膜静脈から血清を採取している。現時点で計39症例から採取しており、うち6例（15%）はStage4症例である。さらに同門脈系血清からexosomeを、超遠心法、及び抽出キットを使用した方法で抽出し、抽出方法がexosome抽出量に影響を与えるかを調べた。大腸癌由来exosomeの表面マーカーといわれるCD9/CD147を測定し、門脈系exosomeに大腸癌由来exosomeが含まれていること、抽出方法はexosome抽出量に影響を与えないことを確認した。また手術前、手術後の末梢血採血も進めている。現在10症例から術前術後末梢血を採取しており、門脈血同様CD9/CD147を測定している途中である。サンプル採取に関しては、大腸癌症例は収集が容易であるが、コントロールとして健常群（憩室炎、虚血性腸炎など）の収集はやや遅れている。採取不能な場合、内視鏡的粘膜切除(EMR)後で癌遺残が全くない症例などを代用する予定である。Exosomeが抽出されている確認として、ナノ粒子トラッキング解析(Nanosight)、及び電子顕微鏡での小胞確認、ウエスタンブロッティング法でのExosomal Markerの確認を行った。各々良好な結果が得られている。現在、さらなるサンプル採取を継続している。exosome内のRNA/microRNA/タンパクを抽出する予定である。最終的にはインテグリンファミリーの解析を行う。将来的に肝転移を来しうる症例を識別し大腸癌肝転移ハイリスク群の早期診断のみならず、治療方針の決定・大腸癌の予後改善に飛躍的な進歩が期待できる。

首先，收集了门静脉​​血清的样品。自2016年4月以来，在结直肠癌手术病例中提取的妊娠降低静脉中已收集血清。目前，总共收集了39例，其中6例（15％）是Stage4病例。此外，使用超级式方法和提取试剂盒从相同的静脉血清中提取外泌体，并检查了提取方法是否影响外泌体提取。已经测量了结直肠癌的结直肠癌的表面标记的CD9/CD147，已经测量了，并且已经证实，已确认门静脉外泌体包含从结直肠癌衍生的外染色体，并且提取方法不会影响提取方法外泌体的提取。手术前后，还促进了外周血收集。目前，正在从10例病例中收集术前术后血中血血液，并且正在测量CD9/CD147以及门户血液。关于采集样本，结直肠癌病例很容易收集，但是健康组（例如息肉炎，缺血性肠炎等）的收集略有延迟作为对照。如果未收集，则在内窥镜粘膜切除（EMR）后没有残留癌症残留物的情况下，它将被替换。为了确认提取的外泌体，在纳米颗粒跟踪分析（Nanosight），具有电子显微镜的通风和蛋白质印迹方法中证实了外泌体标记。每个都有良好的结果。目前，我们继续收集样品。将提取外泌体中的RNA/microRNA/蛋白质。最终，我们分析了整合性家族。可以预期，将来可能会导致肝变化的病例，并且预计不仅早期诊断了结直肠癌肝转移高风险组的早期诊断将是巨大的，而且会很大程度上提高治疗的预后。政策并改善了结直肠癌的预后。