エピジェネティック修飾による新規多能性幹細胞の樹立機構の解明

阐明表观遗传修饰建立新型多能干细胞的机制

基本信息

批准号：
15H06752
负责人：
岡村大治
金额：
$ 0.92万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06752/
关键词：
始原生殖細胞 PGCs EG細胞 vcPGC細胞遺伝子プロファイル RNAシークエンス

项目摘要

vcPGCsは新規性の高い多能性幹細胞であると考えられるので、RNAシークエンスを行い遺伝子プロファイルの比較解析が必須であると考える。しかしここで重要となるのが、比較対象であるEG細胞やvcPGC細胞株の元となる始原生殖細胞の発生ステージの違いも含めた比較である。分化運命決定後のマウス始原生殖細胞では、DNA脱メチル化やヒストン修飾など、様々なエピジェネティックな変化がゲノムワイドで認められる。それらは、周りの体細胞では認められない変化のため、始原生殖細胞が将来全能性を獲得するための再プログラム化に重要なプロセスであると考えられてはいるが、現在までにその変化の一つ一つが、始原生殖細胞のどのような性質の変化に相関したものなのか、その生物学的な意義も含めほとんど分かっていない。そこで、PGCの運命決定直後の7.5日胚から生殖巣へと移動した12.5日胚の始原生殖細胞まで、あらゆるステージのPGCとその派生細胞株（EG細胞、vcPGC細胞）を揃えるために、発生ステージごと（7.5日胚から12.5日胚まで1日刻み）にvcPGCsとEG細胞の樹立を試みた。その結果、全ての発生ステージにおけるPGCより、EG細胞とvcPGC細胞株の樹立に成功した。今後は採取した胚内のPGCsとの比較も含め、各細胞株の発生ステージによる発現遺伝子の変化をプロファイリングすることで、vcPGCsやEG細胞に特異的に発現する遺伝子等の特徴が発生ステージを追って詳細に見えてくると考える。

由于VCPGC被认为是高度新颖的多能干细胞，因此对基因谱进行RNA测序和比较分析被认为是必不可少的。但是，这里重要的是一个比较，该比较包括原始生殖细胞的发育阶段的差异，这是比较靶标的EG细胞和VCPGC细胞系的来源。分化命运测定后，在小鼠原始生殖细胞中观察到各种表观遗传变化，包括DNA脱甲基化和组蛋白的修饰。由于周围的体细胞中未发现的变化，它们被认为是重编程原始生殖细胞以在将来获得无所不能的重要过程，但迄今为止，每种变化的生物学意义鲜为人知，包括生物学意义，每种变化与原始生殖细胞的性质变化有关。因此，我们试图在每个阶段建立VCPGC和EG细胞（1天从7.5天胚胎增加到12.5天的胚胎），以便在每个发育阶段对齐PGC（从7.5天胚胎递增1天增加到12.5天胚胎）。结果，我们在所有发育阶段通过PGC成功地建立了EG细胞和VCPGC细胞系。将来，我们将能够根据每种细胞系的发育阶段的发育阶段来介绍表达基因的变化，包括与收集的胚胎中的PGC进行比较，并且我们相信，在EG细胞中特异性表达的VCPGC和基因等特征将在遵循发展阶段时详细可见。