Ca流入促進物質(CIF)の同定並びにその受容体Caチャンネルの構造と機能の解析

Ca内流启动子(CIF)的鉴定及其受体Ca通道的结构和功能分析

• 批准号: 07672017
• 负责人: 森田 克也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672017/
• 关键词: 受容体Ca^<2+>チャンネル(ROC)機構; Ca^<2+>流入促進物質(CIF); 好中球; 顎下腺細胞; 副腎クロマフィン細胞; ROC機構阻害薬; 活性調節機構

炎症・免疫関連細胞や唾液腺等の非興奮性細胞では、受容体Ca^<2+>チャンネル(ROC)機構が発達しており、細胞外Ca^<2+>の流入がその活性化に重要な役割を果たしている。このROC機構に関しては、最近枯渇したCa^<2+>プールからCa^<2+>流入促進物質(Ca^<2+>-influx factor: CIF)が遊離されCa^<2+>流入を刺激することが報告され、注目を集めたが実体は不明である。ROC機構を選択的に阻害する薬物は新しいタイプのアレルギー・免疫疾患等の治療薬としての可能性が期待されるが、現在まだ知られていない。本研究はCIFおよびCIF結合蛋白質の同定、ROC機構の解明とその特異的阻害薬の開発を目的として、好中球、顎下腺細胞、副腎クロマフィン細胞を用いて検索し、以下の成績を得た。1.血小板活性化因子(PAF)或いはthapsigarginでCa^<2+>プールを枯渇した好中球よりCa^<2+>流入活性を有する物質(CIF)を抽出し、TLCにて部分精製を達成した。CIFは上記3種の細胞全てで同程度のCa^<2+>流入を引き起こした。無処置細胞抽出液中にはCIF活性は認められなかった。2.CIFによるCa^<2+>の流入はprotein kinase Cにより抑制的に調節されていることを認めた。受容体刺激によるCa^<2+>流入は好中球ではtyrosine kinase阻害剤、顎下腺細胞ではguanylate cyclase阻害剤で抑制されたがクロマフィン細胞では影響を与えなかった。3.Econazol,SK&F 96365及びプリン誘導体がCIFによるCa^<2+>流入を抑制し、組織により薬物感受性が異ことを認めた。更に或る種のホルモン誘導体がROC機構を特異的に阻害することを見出した。4.ROC阻害作用を有する薬物はアセチルコリン誘発ムチン分泌(顎下腺細胞)およびカテコールアミン分泌(クロマフィン細胞)を共に抑制した。これらの成績は、ROC機構の情報伝達物質としてCIFがCa^<2+>流入を引き起こし、非興奮性細胞のみならず興奮性細胞においても細胞活性化に重要な役割を果たしている可能性、更にROC機構は組織により差異が存在する可能性を示唆している。加えて阻害薬物の感受性が異なることから、組織選択制の高い新しいタイプの医薬品開発の可能性を示した。又、CIFの同定に時間を要しており、ROC機構の実体の解明は困難であった。なおこの点については今後に残された課題であり、現在更に研究を押し進めている。

在非散发性细胞（例如炎症相关细胞和唾液腺）中，受体Ca^<2+>通道（ROC）机制被开发，细胞外Ca^<2+>的流入在其激活中起重要作用。关于这种ROC机制，据报道Ca^<2+>涌入启动子（CIF）是从最近耗尽的Ca^<2+>池释放的，并刺激Ca^<2+>涌入，引起了人们的注意，但该物质尚不清楚。有选择地抑制ROC机制的药物预计可能是新型过敏，免疫疾病等的治疗剂，但尚不清楚。这项研究使用中性粒细胞，下颌下细胞和肾上腺染色体细胞来鉴定CIF和CIF结合蛋白，阐明ROC机制并开发特定的抑制剂，并获得以下结果。 1。从中性粒细胞中提取具有Ca^<2+>涌入活性的物质（CIF），这些嗜中性粒细胞用血小板激活因子（PAF）或Thapsigargin耗尽了Ca^<2+>池，并通过TLC实现了部分净化。 CIF在上面的所有三个细胞中引起了类似的Ca^<2+>涌入。在完整的细胞提取物中未观察到CIF活性。 2。我们发现，CIF的Ca^<2+>由蛋白激酶C抑制。受体刺激的Ca^<2+>涌入在中性粒细胞中的酪氨酸激酶抑制剂和鸟苷酸环化酶抑制剂中的酪氨酸激酶抑制剂抑制了ca^<2+>涌入。 3。Econazol，SK＆F 96365和嘌呤衍生物抑制CA^<2+>被CIF涌入，发现药物易感性因组织而异。还发现某些激素衍生物特异性抑制了ROC机制。 4。具有ROC抑制作用的药物均抑制乙酰胆碱诱导的粘蛋白分泌（下颌腺细胞）和儿茶酚胺分泌（Chromaffin细胞）。这些结果表明，作为ROC机械的信号传感器，CIF会引起CA^<2+>涌入，并且在不仅在不可激发的细胞中，而且在可激发细胞中也起着重要作用，并且在ROC机械中可能会根据组织而存在差异。此外，对抑制剂药物的不同敏感性表明有可能开发具有高组织选择的新型药物。此外，它花了一些时间来识别CIF，并且很难阐明ROC机制的真实性质。这一点仍然是将来仍然存在的话题，目前正在推动进一步的研究。

项目成果

K. Shibata, K. Morita, S. Kitayama H. Okamoto and T. Dohi: "Ca^<2+>entry induced by calcium influx factor and its regulation by protein kinase C in rabbit neutrophils." Biochemical Pharmacology. (in press).

K. Shibata、K. Morita、S. Kitayama H. Okamoto 和 T. Dohi：“钙流入因子诱导的 Ca^2 进入及其在兔中性粒细胞中受蛋白激酶 C 的调节”。