Ca流入促進物質(CIF)の同定並びにその受容体Caチャンネルの構造と機能の解析

Ca内流启动子(CIF)的鉴定及其受体Ca通道的结构和功能分析

• 批准号: 07672017
• 负责人: 森田 克也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672017/
• 关键词: 受容体Ca^<2+>チャンネル(ROC)機構; Ca^<2+>流入促進物質(CIF); 好中球; 顎下腺細胞; 副腎クロマフィン細胞; ROC機構阻害薬; 活性調節機構

炎症・免疫関連細胞や唾液腺等の非興奮性細胞では、受容体Ca^<2+>チャンネル(ROC)機構が発達しており、細胞外Ca^<2+>の流入がその活性化に重要な役割を果たしている。このROC機構に関しては、最近枯渇したCa^<2+>プールからCa^<2+>流入促進物質(Ca^<2+>-influx factor: CIF)が遊離されCa^<2+>流入を刺激することが報告され、注目を集めたが実体は不明である。ROC機構を選択的に阻害する薬物は新しいタイプのアレルギー・免疫疾患等の治療薬としての可能性が期待されるが、現在まだ知られていない。本研究はCIFおよびCIF結合蛋白質の同定、ROC機構の解明とその特異的阻害薬の開発を目的として、好中球、顎下腺細胞、副腎クロマフィン細胞を用いて検索し、以下の成績を得た。1.血小板活性化因子(PAF)或いはthapsigarginでCa^<2+>プールを枯渇した好中球よりCa^<2+>流入活性を有する物質(CIF)を抽出し、TLCにて部分精製を達成した。CIFは上記3種の細胞全てで同程度のCa^<2+>流入を引き起こした。無処置細胞抽出液中にはCIF活性は認められなかった。2.CIFによるCa^<2+>の流入はprotein kinase Cにより抑制的に調節されていることを認めた。受容体刺激によるCa^<2+>流入は好中球ではtyrosine kinase阻害剤、顎下腺細胞ではguanylate cyclase阻害剤で抑制されたがクロマフィン細胞では影響を与えなかった。3.Econazol,SK&F 96365及びプリン誘導体がCIFによるCa^<2+>流入を抑制し、組織により薬物感受性が異ことを認めた。更に或る種のホルモン誘導体がROC機構を特異的に阻害することを見出した。4.ROC阻害作用を有する薬物はアセチルコリン誘発ムチン分泌(顎下腺細胞)およびカテコールアミン分泌(クロマフィン細胞)を共に抑制した。これらの成績は、ROC機構の情報伝達物質としてCIFがCa^<2+>流入を引き起こし、非興奮性細胞のみならず興奮性細胞においても細胞活性化に重要な役割を果たしている可能性、更にROC機構は組織により差異が存在する可能性を示唆している。加えて阻害薬物の感受性が異なることから、組織選択制の高い新しいタイプの医薬品開発の可能性を示した。又、CIFの同定に時間を要しており、ROC機構の実体の解明は困難であった。なおこの点については今後に残された課題であり、現在更に研究を押し進めている。

受体Ca 2+ 通道(ROC)机制是在非兴奋性细胞如炎症/免疫相关细胞和唾液腺中形成的，并且细胞外Ca 2+ 的流入对于它们的激活起着重要作用。角色。关于该ROC机制，Ca^<2+>-内流因子(CIF)从最近耗尽的Ca^<2+池中释放出来，并促进Ca^<2+>内流。据报道，它刺激人并具有作用。引起了人们的关注，但实际物质尚不清楚。选择性抑制ROC机制的药物有望作为新型过敏性和免疫性疾病的治疗剂，但目前尚不清楚。在本研究中，我们利用中性粒细胞、颌下腺细胞和肾上腺嗜铬细胞进行了研究，以鉴定CIF和CIF结合蛋白，阐明ROC机制，并开发特异性抑制剂，并获得了以下结果。 1.从已用血小板活化因子(PAF)或毒胡萝卜素耗尽Ca^<2+>池的中性粒细胞中提取具有Ca^<2+>内流活性(CIF)的物质，并通过TLC部分纯化。 CIF在所有三种类型的细胞中诱导相似水平的Ca 2+ 流入。在未经处理的细胞提取物中未观察到 CIF 活性。 2.我们发现CIF对Ca^2+的流入受到蛋白激酶C的抑制性调节。受体刺激的Ca 2+ 流入被嗜中性粒细胞中的酪氨酸激酶抑制剂和颌下腺细胞中的鸟苷酸环化酶抑制剂抑制，但对嗜铬细胞中没有影响。 3.益康唑、SK&F 96365和嘌呤衍生物抑制CIF诱导的Ca^2+内流，并且观察到药物敏感性根据组织而不同。此外，我们发现某些激素衍生物特异性抑制 ROC 机制。 4.具有ROC抑制作用的药物可抑制乙酰胆碱诱导的粘蛋白分泌（颌下腺细胞）和儿茶酚胺分泌（嗜铬细胞）。这些结果表明，CIF作为ROC机制的信号传递者，引起Ca 2+ 流入，并且不仅在非兴奋性细胞中而且在兴奋性细胞中可能在细胞活化中发挥重要作用。 ROC 机制因组织而异。此外，由于抑制药物的敏感性不同，因此证明了开发具有高组织选择性的新型药物的可能性。此外，CIF的识别需要时间，因此很难阐明ROC机制的实质内容。这一点仍然是未来的一个问题，我们目前正在推进进一步的研究。

项目成果

K. Shibata, K. Morita, S. Kitayama H. Okamoto and T. Dohi: "Ca^<2+>entry induced by calcium influx factor and its regulation by protein kinase C in rabbit neutrophils." Biochemical Pharmacology. (in press).

K. Shibata、K. Morita、S. Kitayama H. Okamoto 和 T. Dohi：“钙流入因子诱导的 Ca^2 进入及其在兔中性粒细胞中受蛋白激酶 C 的调节”。