細胞の自然死(アポプトーシス)に伴う糖鎖抗原の変化とその遺伝子的背景の研究

与自然细胞死亡（细胞凋亡）相关的碳水化合物抗原变化及其遗传背景的研究

基本信息

批准号：
06670178
负责人：
神奈木玲児
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、細胞がアポプトーシスをおこす際に、細胞表層の糖鎖抗原がどのように変化するかを解析し、その変化の制御機構を明らかにすることにある。特に糖鎖抗原の中でも、シアリルLe^X抗原やシアリルLe^a抗原のように、すでに細胞接着のリガンドであることが判明している糖鎖の変化の検索に重点をおいた。ヒト大腸癌培養細胞株HT-29およびColo201を実験対象に選んだが、これらの細胞にアポプトーシスを引き起こすには、抗FAS抗体処理のみでは不十分であったので、抗FAS抗体とIFNγによる刺激を併用してアポトーシスを誘発した。これに伴う細胞表面糖鎖の変化を各種抗糖鎖モノクローナル抗体を用いたフローサイトメイトリ-で検索したところ、アポトーシス誘発後に両細胞でLe^XおよびLe^y糖鎖の発現の上昇が認められた。この変化は、IFNγによる単独刺激では観察されなかった。合成糖鎖を基質として、α1→2フコシルトランスフェラーゼ、α1→3 フコシルトランスフェラーゼ、α1→4 フコシルトランスフェラーゼおよびβ1→4 ガラクトシルトランスフェラーゼの酵素活性を測定したところ、アポトーシス誘発後の両細胞株において、α1→3 フコシルトランスフェラーゼの活性の増加が認められた。現在までにα1→3 フコシルトラスフェラーゼは5種類(Fuc-TIII,IV,V,VI,VII)の分子種が存在することが知られている。 Northern Blotting および RT-PCR法を用いてα1→3フコシルトランスフェラーゼmRNA発現を検討した結果、アポトーシス誘発後にFuc-TIV(Myeloid型)の発現上昇とFuc-TIII,VIの発現低下が認められた。Fuc-TV,VIIIは検出感度以下であった。以上の結果より、活性の増加が認められたα1→3 フコシルトランスフェラーゼ分子種は、ミエロイド型のFuc-TIVである可能性が高いと考えられた。

本研究的目的是分析细胞凋亡时细胞表面糖链抗原如何变化，并阐明这些变化的控制机制。在碳水化合物抗原中，我们重点寻找已知作为细胞粘附配体的碳水化合物链的变化，例如唾液酸Le^X和唾液酸Le^a抗原。选择培养的人结肠癌细胞系HT-29和Colo201作为实验对象，但单独使用抗FAS抗体处理不足以诱导这些细胞凋亡，因此我们联合使用抗FAS抗体和IFNγ刺激诱导细胞凋亡。当我们使用各种抗聚糖单克隆抗体通过流式细胞术寻找与此相关的细胞表面糖链的变化时，我们观察到诱导细胞凋亡后，两种细胞中 Le^X 和 Le^y 糖链的表达均增加。完成了。单独用 IFNγ 刺激时未观察到这种变化。当我们使用合成糖链作为底物测量α1→2岩藻糖基转移酶、α1→3岩藻糖基转移酶、α1→4岩藻糖基转移酶和β1→4半乳糖基转移酶的酶活性时，我们发现α1→3岩藻糖基转移酶活性增加。迄今为止，已知α1→3岩藻糖基转移酶有五种分子种类（Fuc-TIII、IV、V、VI和VII）。使用Northern Blotting和RT-PCR检查α1→3岩藻糖基转移酶mRNA表达的结果，我们发现在诱导细胞凋亡后，Fuc-TIV（髓样型）的表达增加，而Fuc-TIII、VI的表达减少。 Fuc-TV,VIII低于检测灵敏度。从以上结果可以认为，观察到活性增加的α1→3岩藻糖基转移酶分子种类很可能是骨髓型Fuc-TIV。