軸鞭毛遺伝子の解析によるボレリアの進化遺伝学的研究

通过轴鞭毛基因分析对疏螺旋体进行进化遗传学研究

基本信息

批准号：
06640912
负责人：
福長将仁
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Fukuyama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ライム病ボレリア媒介性のシュルツェマダニ、野鼠血液および野鳥寄生のシュルツエマダニから分離培養したボレリアの分子生物学的性格付けをおこなった。5株のボレリアはずべて38kDaの鞭毛蛋白を有し、これはライム病ボレリアの41kDa蛋白に較べて分子量が小さく、回帰熱ボレリアに近いものであった。そのうちの一株の鞭毛遺伝子をクローンして塩基配列を明らかにし、ライム病、回帰熱ボレリアの鞭毛遺伝子の配列とそれぞれ比較したところライム病ボレリアとは83%、回帰熱ボレリアとは91%の相同性を示した。さらにリボソームRNA遺伝子の構成も回帰熱ボレリアと一致し、制限酵素切断点の配列もよく保存されていた。ついで、この分離株のG+C含量を高速液体クロマトグラフィーにより測定してボレリア属細菌のG+C含量と一致する(28〜30%)ことを確認した。さらに回帰熱ボレリアおよびライム病ボレリアとのゲノムDNA hybridizationを行って互いの相同性を検討した。現在までにライム病ボレリアは3種が報告されているがすべての種との相同性は10%以下であり、回帰熱ボレリアとの相同性も50%以下であった。これらすべての実験結果はこの分離株がボレリア属の新種であることを示している。さらに16S rRNA遺伝子の塩基配列も決定し、他のボレリアと比較したところライム病ボレリア種とは95%、回帰熱ボレリアとは97%の相同性が確かめられた。この結果も我々の分離したボレリアが新種であることを支持していた。以上の結果から、このボレリア種は回帰熱ボレリアに近い起源をもちながら、ライム病ボレリア媒介マダニに寄生するように適応した結果、ここで明らかにしたような分子生物学的性質を有するようになったと考えられた。

我们已经从渗出岩 - 传播的schulzema tick虫，野生大鼠血和野生鸟寄生的schulzema tick虫中进行了分离和培养的疏螺旋体的分子生物学特征。所有五个菌株的伯氏菌株均具有38 kDa的鞭毛蛋白，其分子量小于莱姆病的41 kDa蛋白，并且更接近回归热波雷利亚。将其中一种菌株的鞭毛基因克隆起来以揭示碱基序列，并且与莱姆病和回归发烧疏螺旋体的鞭毛基因序列相比，它显示出与莱姆病硼酸疏松氏病的83％同源性和91％同源性与回归性发烧的发烧。此外，核糖体RNA基因的组成与回归嗜热疏螺旋体一致，并且限制酶断点序列也得到了很好的保守。然后，通过高性能液相色谱法确定该分离株的G+C含量，以确认它与伯氏细菌的G+C含量一致（28-30％）。此外，使用消退热渗漏和莱姆病漏洞进行基因组DNA杂交，以检查它们之间的同源性。迄今为止，已经报道了三种莱姆病硼菌，但与所有物种的同源性均小于10％，而回归发烧的疏螺旋体的同源性小于50％。所有这些实验结果表明，该分离物是伯氏属的新物种。此外，确定了16S rRNA基因的核苷酸序列，并且与其他疏螺旋体相比，可以证实，同源性与莱姆病渗透症物种为95％，而97％的同源性则为97％，伴有回归发烧的博雷利亚。该结果还支持了我们孤立的疏螺旋体的新物种。基于上述结果，人们认为，尽管这种疏螺旋体具有类似于回归的嗜热疏螺旋体的起源，但它适用于寄生的莱姆病渗透症 - 葡萄球菌滴虫，结果，它已成为此处揭示的分子生物学特性。