アドレノメデュリン(AM)受容体の役割の解明および新規AM受容体の探索

阐明肾上腺髓质素 (AM) 受体的作用并寻找新的 AM 受体

基本信息

批准号：
14657255
负责人：
江藤胤尚
金额：
$ 1.73万
依托单位：
University of Miyazaki (2004)宮崎医科大学 (2002-2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.AM受容体の機能を特異的に抑制する手段の確立(主として江藤胤尚と桑迫健二が行う):(1)AMの受容体結合を抑制する遺伝子の探索:我々は、AM受容体の修飾蛋白である3つのRANP1,-2,-3にはAMの結合部位はなく、これらがbinding pocketの形成に不可欠であることを明らかにしてきた。AMの結合部位はその受容体の構成蛋白であるCRLRに存在していると考え、この責任領域を特定すべく、CRLRとVIP2受容体(ともにClassBのG蛋白共役型受容体に属すが、RAMPはVIP2受容体に作用できない)のキメラ蛋白(9種)を独自に作製した。これらのキメラ蛋白のN末端にV5タグを付加して、各RAMPとの共発現後の細胞膜発現をFACS解析により定量化した。さらに、^<125>I-AMの結合性やAMによるcAMP反応性を検討することにより、AMの結合に重要なCRLRの領域を大まかに同定することが出来た。今後、その領域を標的に種々の変異体(キメラ蛋白/欠失体/1塩基置換体)を順次作製して、最終的に責任領域を同定したい。(2)AM結合に重要なRAMP領域を認識する抗体の作製:上記(1)の検討から、AMはCRLRの細胞外のN端領域と第1ループに結合していると考えられるため、その領域をHEK-293細胞に過剰発現させたものを抗原としてポリクローナル抗体の作製を試みているところであり、まだ最終結果は得られていない。(3)AM受容体の蛋白合成を阻害するアンチセンスとsiRNAの作製:これらに関しても、現在検討中である。2.新規AM受容体の探索(主として北村和雄が行う):上記1の手段をすべて確立した後に、本研究を行う予定である。

1。建立一种平均抑制AM受体的功能（主要由Tane Eto和Kenji Kuwaso）的手段：（1）抑制AM受体键的基因：我们是AM受体。 3是修饰蛋白的，没有AM的结合位点，对于结合口袋的形成是必不可少的。我认为，AM的结合位点存在于CRLR中，CRLR是受体的组成蛋白，并且要识别该责任区域CRLR和VIP2受体（它们都属于基于ClassB G-蛋白质的受体，但渐变。最初是由VIP2受体的嵌合蛋白（九种类型）制成的。将V5 TAG添加到这些嵌合蛋白的n端中，通过FACS分析对CO表达后的CO表达后的细胞膜表达。此外，可以广泛识别通过检查^<115> i-am和cAMP反应特性的粘合性和cAMP反应特性，CRLR面积对于AM结合很重要。将来，我们将逐渐生产针对该区域的各种品种（嵌合蛋白/延迟/1个基本取代基），并最终确定责任面积。（2）识别对AM键重要的坡道区域的抗体的产生：从上述研究中，认为AM被认为是与CRLR的第一个循环键合到第一个循环正在尝试产生多克隆抗体作为一种过表达HEK-293细胞区域的抗原，尚未获得最终结果。（3）抑制AM受体的蛋白质合成和siRNA的产生的抗强度：当前正在考虑这些蛋白质。 2。搜索新的AM受体（主要由Kazuo Kitamura）：在建立上述所有均值之后，将进行这项研究。