成人T細胞白血病ウイルスの潜伏感染と再活性化の機構

成人T细胞白血病病毒潜伏感染和再激活机制

基本信息

批准号：
05670922
负责人：
松下修三
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670922/
关键词：
ATL HTLV-I 潜伏感染再活性化

项目摘要

HTLV-1はATLだけでなく、HAMや関節炎、ぶどう膜炎などの多臓器病変を起こすことがわかってきた。しかし、HTLV-1がそれらの病変をどのようにして起こすかについては未だ不明のままである。その原因の1つは末梢血中にあるHTLV-1感染細胞の多くが潜伏感染の状態にあることにある。この潜伏感染から再活性化に至る機構の解析はHTLV-1の病原性解明の重要な手がかりとなると考えられる。我々はこれまでにHTLV-1陽性でありながらウイルスRNA及び蛋白が検出されない細胞株3Se6を樹立した。3Se6は患者の腫瘍細胞と同じproviralDNA integrationとT細胞レセプター再構成バンドが観察され、腫瘍細胞と同じクローンと考えられた。またPMA下に培養するとウイルスRNA及び蛋白の発現が認められた。PMAよって再活性化されたHTLV-1は、HOS細胞に合胞体を形成させる能力と、正常T細胞を腫瘍化させる能力があることがわかった。新たに腫瘍化した細胞ではHTLV-1の発現がみられた。これらのことから3Se6におけるウイルスの潜伏感染はウイルス側ではなく細胞側の因子によっていると考えられた。我々は更に潜伏感染機構を調べるため、欠失変異をもつ数種のHTLV-1-LTR-CATを用いてCAT assayを施行し、転写レベルでの解析を行なったが、これまでの結果ではT細胞コントロールと比較しても有意な違いを認めなかった。またHTLV-1-LTRの2lbp結合蛋白(CREB、ATF-1、Ets-1反応性領域結合蛋白)についてもゲルシフトアッセイ法にて解析したがPMA刺激による明らかな差異は認められなかった。(いずれもpreliminary data)これらのことから潜伏機構とHTLV-1-LTRの関係はいまだ明瞭ではないが、更に実験系を改善して検討を続けている。また最近京大グループより提唱されたプロモーター/エンハンサーであるHIRE(HTLV-1 Internal Regulatory Element)-CATを作製し潜伏との関わりを検討中である。一方、pX領域にコードされる蛋白はこれまで既にp40^<Tax>、p27^<Rex>、p21^<Rex>が知られていたが、Franchini.Gら(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:8813,1992)により更にp12、p13、p30の少なくとも3種類の蛋白が存在することがわかってきた。この中でp12はtransformationとの関与が示唆されており興味深い。我々は3Se6をPMAで再活性化して発現するsubgenomic viral RNAを解析することにより、(1)Hidaka.Mら(The EMBO Journal 7:519,1988)により示されたヒト上皮細胞でのsubgenomic viral RNAの経時的な発現様式をATL患者由来細胞である3Se6において再確認し、(2)pX領域由来のRNAをRT-PCR法により検出し、潜伏感染及びその再活性化との関与の有無について新しい蛋白をコードするmRNAも含めて現在検討中である。

研究发现HTLV-1不仅会引起ATL，还会引起HAM、关节炎、葡萄膜炎等多器官病变。然而，HTLV-1 如何引起这些病变仍不清楚。原因之一是外周血中许多HTLV-1感染的细胞处于潜伏感染状态。分析从潜伏感染到再激活的机制被认为可以为阐明HTLV-1的发病机制提供重要线索。我们之前建立了细胞系 3Se6，该细胞系 HTLV-1 呈阳性，但没有可检测到的病毒 RNA 或蛋白质。 3Se6被观察到与患者肿瘤细胞具有相同的前病毒DNA整合和T细胞受体重排带，并被认为与肿瘤细胞是同一克隆。此外，当在PMA下培养时，观察到病毒RNA和蛋白质的表达。研究发现，PMA重新激活的HTLV-1具有引起HOS细胞合胞体形成的能力，并且具有引起正常T细胞致瘤的能力。在新的致瘤细胞中观察到 HTLV-1 表达。这些结果表明，3Se6中的潜伏病毒感染是由细胞侧因素而不是病毒侧因素引起的。为了进一步研究潜伏感染机制，我们使用几种具有缺失突变的HTLV-1-LTR-CAT进行了CAT检测，并分析了转录水平与细胞对照相比没有观察到显着差异。此外，通过凝胶位移测定分析HTLV-1-LTR的2lbp结合蛋白（CREB、ATF-1和Ets-1反应区结合蛋白），但由于PMA刺激没有观察到明显差异。（所有数据均为初步数据）基于上述，潜伏机制与HTLV-1-LTR之间的关系仍不清楚，但我们正在不断完善实验系统并继续研究。此外，我们还创建了京都大学小组最近提出的启动子/增强子HIRE（HTLV-1内部调节元件）-CAT，目前正在研究其与潜伏期的关系。另一方面，pX 区域编码的蛋白质已知为 p40^<Tax>、p27^<Rex> 和 p21^<Rex>，但 Franchini.G 等人 (Proc.Natl.Acad. Sci. USA，89：8813，1992）揭示了至少三种类型的蛋白质：p12、p13 和 p30。其中，p12 很有趣，因为它被认为参与转化。通过用 PMA 重新激活 3Se6 并分析表达的亚基因组病毒 RNA，我们证明了 (1) Hidaka.M 等人显示的人上皮细胞中的亚基因组病毒 RNA (The EMBO Journal 7:519, 1988)；我们再次确认了ATL患者来源的3Se6细胞中RNA的时间表达模式，并且（2）通过RT-PCR检测了来自pX区域的RNA，以确定其是否参与潜伏感染及其再激活，目前我们正在研究其用途。编码新蛋白质的 mRNA。