食道癌の自律増殖に関する研究ーautocrine growth factorの研究

食管癌自主生长的研究——自分泌生长因子的研究

• 批准号: 04807091
• 负责人: 片山 正文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807091/
• 关键词: MEE; C8細胞; aFGF; (ヒト食道癌細胞株)TE-1; TE-9; 食道癌の自律増殖; PCR

マウス食道上皮由来の悪性細胞株(MEE/C8細胞)よりmRNAを調整し、さらにcDNAを作製した。マウスのacidic fibroblast growth factor(aFGF)の塩基配列を参考にプライマーを作製し、PCRを行った。PCRにより単一のバンドを得たので、これを切りだしプラスミドに組み込み、サブクローニングを行った。この塩基配列を調べたところ、aFGFとまったく同じであり、MEE/C8細胞はaFGFを発現していることが確認された。aFGFをプローブとしてノーザンブロッテイングを行ったが、これによってもaFGFの発現が確認された。ヒト食道癌に関しても培養細胞を用いて検討を行った。当科で樹立したヒト食道癌細胞株TE-1、TE-9からmRNAを調整し、aFGFのプローブを用いPCRを行った。これらの細胞株でもマウスの細胞株MEE/C8と同様なバンドが得られ、aFGFの発現が確認された。aFGF蛋白に関しては、生物学的活性を測定する方法と抗体を用いた方法とで検討を行った。生物学的活性はマウス食道上皮細胞に対する増殖促進効果を^3Hチミジンの取り込みで測定した。MEE/C8細胞やTE-9の細胞抽出液には増殖促進活性があり、これらはヘパリンに親和性があった。部分精製を行い検討した結果では、これらの活性はaFGFに類似しているが、免疫学的方法では同定できなかった。Heparin-Copper Biaffinity ChromatographyやHPLCなどで精製を試みたが、精製は困難であった。MEE/C8細胞、TE-1、TE-9にaFGFのmRNAの発現、aFGF様の活性は確認されたが、その蛋白の確認は困難であった。またaFGF様の別のfactorを精製するのも困難であった。結局これらの細胞はaFGFあるいはさらに類似の別の増殖因子を産生していることが確認された。これらの知見は食道癌の自律増殖を理解するうえで重要と思われ、現在研究を継続中である。

从源自小鼠食管上皮的恶性细胞系（MEE/C8细胞）制备mRNA，并进一步产生cDNA。根据小鼠酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的核苷酸序列制备引物，并进行PCR。通过 PCR 获得单条带，将其切除并掺入质粒中进行亚克隆。当检查该核苷酸序列时，发现它与aFGF完全相同，并且证实MEE/C8细胞表达aFGF。使用aFGF作为探针进行Northern印迹，由此也确认了aFGF的表达。我们还使用培养细胞研究了人类食道癌。从我们科建立的人食管癌细胞系TE-1和TE-9制备mRNA，并使用aFGF探针进行PCR。在这些细胞系中获得了与小鼠细胞系MEE/C8相似的条带，证实了aFGF的表达。对于aFGF蛋白质，我们研究了生物活性的测定方法和使用抗体的方法。通过掺入^3H胸苷对小鼠食管上皮细胞的增殖促进作用来测量生物活性。 MEE/C8 细胞和 TE-9 细胞的细胞提取物具有增殖促进活性，并且对肝素具有亲和力。部分纯化和研究的结果表明，这些活性与aFGF相似，但无法通过免疫学方法鉴定。尝试使用肝素-铜双亲和色谱法和HPLC进行纯化，但纯化很困难。尽管在MEE/C8细胞、TE-1和TE-9中证实了aFGF mRNA表达和aFGF样活性，但很难确认该蛋白质。纯化另一种 aFGF 样因子也很困难。最终证实这些细胞产生 aFGF 或另一种类似的生长因子。这些发现被认为对于理解食管癌的自主生长很重要，目前研究正在进行中。