Brn4による間葉系幹細胞からの蝸牛線維細胞への分化誘導と難聴の再生医学への応用

Brn4诱导间充质干细胞向耳蜗纤维细胞分化及其在听力损失再生医学中的应用

基本信息

批准号：
19659440
负责人：
中澤詠子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659440/
关键词：
Brn-4 内耳線維細胞再生内耳の再生先天性難聴 Brn-4転写因子

项目摘要

内耳の再生については有毛細胞・ラセン神経節が着目され、最新の哺乳類の動物実験では薬物障害モデルで徐々に証明されてきている。感音難聴に対する遺伝子治療の突破口として、アデノウイルスベクターによるAtoh1遺伝子の内耳への導入によってアミノ配糖体抗生物質による有毛細胞の変性が回復したことが挙げられる。しかしながら、先天性難聴においては未だ障害細胞の再生は実現されていない。蝸牛線維細胞は有毛細胞・ラセン神経節に比較して、その分化誘導と再生は比較的容易であることが知られており、その実現の可能性が高いと考えられる。本研究は、自己の組織を用いて難聴のターゲット細胞である線維細胞の再生技術を開発することを目的とした。本研究ではBrn4欠損マウス内耳への細胞移植を行うため、骨髄間葉系幹細胞の樹立および、これまで報告されていない蝸牛組織由来間葉系幹細胞の樹立を試みた。マウス骨髄由来間葉系幹細胞は国立成育医療センターとの共同研究により行われた。C57BL/6マウス大腿骨の培養液還流を行い骨髄間質系細胞の初代培養系を確立させ、この継代培養により間葉系幹細胞を樹立した。移植後の細胞の動態を可視化するため、同細胞にEGFPを発現するアデノウイルスベクターを感染させることにより蛍光標識した。また、これまで報告されていない蝸牛由来の間葉系幹細胞を得るため生後0日齢のC57BL/6マウスの蝸牛コルチ器組織より初代培養法を検討、その後の継代培養により間質系細胞の樹立法を検討した。その結果、蝸牛組織由来の初代培養系は数回の継代により増殖させ、一部は脂肪細胞に分化した。更に継代を繰り返すことにより骨髄間葉系幹細胞様の形態を示す細胞系を得た。今後、同細胞の分化能の解析および分化誘導の検討を行う予定である。

毛细胞和腔神经节已集中在内耳的再生上，最新的哺乳动物动物实验已在药物障碍模型中逐渐证明。感官听力损失的基因治疗的突破是通过使用腺病毒载体将ATOH1基因引入内耳，并用氨基糖苷抗生素恢复毛细胞的变性。但是，先天性听力损失尚未实现受损细胞的再生。与毛细胞和腔神经节相比，已知耳蜗原纤维细胞相对容易诱导分化和再生，并且人们认为实现它们的可能性很高。这项研究旨在使用自己的组织开发一种技术来再生纤维细胞，即听力损失的目标细胞。在这项研究中，我们试图建立骨髓间充质干细胞，并建立先前未报告的间充质干细胞，以便将细胞移植到BRN4缺陷型小鼠的内耳中。与国家儿童保健中心合作进行了小鼠骨髓来源的间充质干细胞。将C57BL/6小鼠股骨回流以建立骨髓基质细胞的原发性培养系统，并通过该亚培养建立间充质干细胞。为了可视化植入后细胞的动力学，通过用表达EGFP的腺病毒载体感染细胞来标记细胞。此外，为了从人工耳蜗获得未报告的间充质干细胞，我们研究了0天大的C57BL/6小鼠的耳蜗皮层器官组织的原发性培养方法，然后通过亚培养研究了基本细胞的建立。结果，从人工耳蜗组织中得出的主要培养系统是通过多个通道生长的，有些则分化为脂肪细胞。此外，重复的通道重复以获得显示骨髓间充质干细胞样形态的细胞系。将来，我们计划分析同一细胞的分化能力并研究分化的诱导。