プレスチン結晶化の試み〜聴覚を鋭敏にしているモーター蛋白質の構造解明を目指して〜

尝试结晶prestin〜旨在阐明使听力敏感的运动蛋白的结构〜

• 批准号: 18659495
• 负责人: 和田 仁
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659495/
• 关键词: 分子モータ; 膜タンパク質; Prestin; 2次元結晶; 原子間力顕微鏡; 国際研究者交流; スイス

哺乳類の聴覚は内耳外有毛細胞の伸縮運動により鋭敏なものになっている.その伸縮運動の源は細胞側壁に高密度に発現しているタンパク質モータprestinの構造変化であると考えられている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,prestinの2次元結晶を作製し,その結晶を用いて,原子間力顕微鏡によるprestinの原子レベルでの可視化を目指した.本研究では,まず,これまでに構築したFLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞からprestinを精製した.精製したサンプルをSDS-PAGEで評価し,以降の実験に十分な純度まで精製できていることを確認した.また,細胞上のprestinの構造の安定性を検討した結果,サリチル酸ナトリウムが存在するとprestinの構造が安定することが明らかになった.これはprestinの結晶を作製する際にサリチル酸ナトリウムを添加すると良いことを示唆している.さらに,FLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞の細胞膜を単離し,細胞膜中のFLAGタグ融合型prestinをQ dotで標識した.そして,それを原子間力顕微鏡を用いて,Q dotを示す粒子の周辺の構造物の詳細な形状を観察した.その結果,prestinを示すと考えられる4つの突起を有し直径10nm前後の構造体を観察することが出来た.

哺乳动物的听力因内耳外毛细胞的拉伸运动而变得敏感。这种拉伸运动的来源被认为是运动蛋白prestin的结构变化，该蛋白密集表达在细胞的侧壁上。自 Prestin 被鉴定以来，人们对其进行了各种研究。 n 的形状和结构变化机制尚未阐明，因此，在本研究中，我们创建了 prestin 的二维晶体，​​并使用该晶体使用原子力显微镜在原子水平上可视化 prestin。首先使用我们迄今为止构建的FLAG标签融合类型presti。我们从稳定表达N的细胞中纯化了prestin。通过SDS-PAGE评估纯化的样品，并确认其已纯化至足以用于后续实验的纯度。检查prestin的性质的结果是水杨酸钠的存在。结果表明，prestin的结构变得稳定，这表明在制备prestin晶体时添加水杨酸钠是有效的。此外，稳定表达FLAG标记的prestin的细胞的细胞膜得到稳定。在细胞膜中。然后，使用原子力显微镜，我们观察了Q点颗粒周围结构的详细形状。结果，我们发现它有四个被认为是prestin的突起，我们能够在10 nm左右的结构中观察到。直径。

项目成果

Handbook of Noise and Vibration Control

• DOI: 10.1121/1.2973236
• 发表时间: 2008-10
• 期刊: Journal of the Acoustical Society of America
• 影响因子: 2.4
• 作者: S. Sommerfeldt

Immune Atomic Force Microscopy of the Plasma Membrane of Prestin-Transfected Chinese Hamster Ovary Cells Using Quantum Dots

使用量子点对 Prestin 转染的中国仓鼠卵巢细胞质膜进行免疫原子力显微镜检查

• 发表时间: 2008
• 作者: Manase K;Endo T;Chida M;Nagasawa K;Honnma H;Yamazaki K;Kitajima Y;Goto T;Kanaya M;Hayashi T;Mitaka T;Saito T.;Michio Murakoshi
• 通讯作者: Michio Murakoshi

Analysis of the Dynamic Behavior of the Inner Hair Cell Stereocilia by the Finite Element Method

• DOI: 10.1299/jsmec.49.828
• 发表时间: 2006-09
• 期刊: Jsme International Journal Series C-mechanical Systems Machine Elements and Manufacturing
• 作者: T. Matsui;C. Nakajima;Yui Yamamoto;M. Andoh;Koji Iida;M. Murakoshi;S. Kumano;H. Wada

Imaging by atomic force microscopy of the plasma membrane of prestin-transfected Chinese hamster ovary cells

• DOI: 10.1007/s10162-006-0041-z
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JARO-JOURNAL OF THE ASSOCIATION FOR RESEARCH IN OTOLARYNGOLOGY
• 影响因子: 2.4
• 作者: Murakoshi, Michio;Gomi, Takashi;Wada, Hiroshi
• 通讯作者: Wada, Hiroshi

Contribution of the GTSRH sequence to the folding of prestin: refolding of transport-defective prestin mutants by salicylate

GTSRH 序列对 prestin 折叠的贡献：水杨酸对运输缺陷 prestin 突变体的重折叠

• 发表时间: 2008
• 作者: M. Rashel;松崎 茂展;内山 淳平;前田 良浩;竹村 伊代;今井 章介;鳥飼源史;Izumi-Nagai K;Izumi-Nagai K;Yokoi M;Yokoi M;Jin XH;大野重昭;古館直樹;Jin X H;Suzuki Y;Jin XH;吉田和彦;Ohno S;Ohno S;嶋澤 雅光;嶋澤 雅光;嶋澤 雅光;Nakashima M;Sato D;Yoko Kitsunai;Hiroshi Wada;Michio Murakoshi;Michio Murakoshi;Michio Murakoshi;Toshihiro Matsui;Michio Murakoshi;Shun Kumano
• 通讯作者: Shun Kumano