胚性幹細胞を用いた腎前駆細胞の樹立および腎組織の再構築筑に関する研究

胚胎干细胞建立肾祖细胞及重建肾组织的研究

• 批准号: 18659300
• 负责人: 内山 聖
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659300/
• 关键词: ES細胞; 腎前駆細胞; WT-1遺伝子; WT1遺伝子; Sall1遺伝子

腎前駆細胞の培養法の開発WT-1遺伝子座に緑色蛍光遺伝子EGFPがノックインされたES細胞を樹立した。このES細胞による胚様体の細胞をコラゲナー用いて単離し、胎生13日から胎生16日までの後腎とコラーゲンゲルによる3次元共培養を数日行いEGEPの発現を示す細胞を得ることができた。このEGFPの発現を示す細胞をcell sortingにより分取しマウス腎皮膜下に移植して、2週後に腎組織に分化するか組織学的に解析した。しかしながら、糸球体あるいは尿細管様構造は認められず、形態学的に腎組織と考えられる組織は形成されなかった。EGFPの発現を示す細胞が腎前駆細胞であるならば、どのような分化段階にあるのか調べた。WT-1、Sall-1、Eya-1、Lim-1、Pax-2などの腎発生初期に働く遣伝子群の発現がみられるのみなのか、それとも、かなり分化が進んだ時期のWnt-4、nephrin、synaptopodin、aquaporin-1、aquaporin-2等の腎マーカー遺伝子がすでに発現しているのか、RT-PCRにより調べたところ、WT-1、Pax-2の発現が認められたが、他の遺伝子の発現は認められなかった。この結果腎発生初期に相当する腎前駆細胞の可能性が考えられた。次いで、腎前駆細胞の形質を失わずに継代増殖できる培養法を開発する目的で、Atalaらのウシ後腎細胞の培養法(Lanza RP, et al: Nature Biotech 20:689-696,2002)を参考にして試みたが、途中でWT-1、Pax-2の発現はoffになってしまい、腎前駆細胞の形質を失わずに継代増殖できる培養法を研究期間内に開発することはできなかった。腎前駆細胞の分化能の解析EGFPの発現を示す細胞を4週齢のマウス腎皮質に注入し、4週間後に腎臓を摘出して組織学的解析を行った。この解析では、X-gal染色により青色に染まる細胞は検出されず、EGFPの発現を示す細胞は、糸球体上皮細胞、血管内皮細胞、尿細管細胞などに分化する前に死滅したと考えられた。腎前駆細胞シートを用いたネフロンの再構築および腎組織再生の検討腎前駆細胞の形質を失わずに継代増殖できる培養法を開発できなかったので、この検討は実施できなかった。

建立了肾脏祖细胞ES细胞培养方法的开发，在将绿色荧光基因EGFP敲入WT-1基因座中。使用这些ES细胞的胚胎体细胞使用胶原蛋白分离，并使用肾上腺从胚胎生命的第13天的胚胎寿命的第13天到胚胎寿命的第16天的胚胎寿命16天的胚胎寿命16天的胚胎寿命16天的胚胎寿命进行了16天的胚胎寿命进行了16天的胚胎寿命，该细胞表现出了eNbryonic Life的第13天，该胚胎寿命是胚胎生命的几个细胞的eScryonic Life the Ercryonic Life the Ercranic en ever e 16天的第13天，并将其共培养。通过细胞分类将显示EGFP表达的细胞分离，并在小鼠的肾脏膜下植入，并在2周后将细胞分化为肾脏组织或组织学分析。但是，未观察到肾小球或管状结构，并且没有形成形态学上肾脏组织的组织。如果表现出EGFP表达的细胞是肾脏祖细胞，则分化的阶段是。当RT-PCR研究肾脏标记基因（例如WT-1，SALL-1，EYA-1，LIM-1，PAX-2）等肾脏标记基因的表达是否在肾脏发育的早期阶段起作用，或者是肾脏标记基因，例如Wnt-4，Nephrin，Nephrin，nephrin，Synaptopodin，aquapopodin，aquaporin-1和Aquaporin-1和Aquaporin-2的进展，均与PAXERIANG WIND AND-1不同观察到，但没有表达其他基因。这表明肾脏祖细胞细胞与肾脏发育的早期阶段相对应的可能性。 Next, with the aim of developing a culture method that allows for passage growth without losing the renal progenitor cell tr​​aits, we tried using Atala et al.'s culture method of post-bovine kidney cells (Lanza RP, et al: Nature Biotech 20:689-696, 2002), but the expression of WT-1 and Pax-2 was turned off midway, and we were unable to develop a culture method that allows passage growth without losing the renal progenitor细胞性状。对显示EGFP表达的肾脏祖细胞细胞的分化潜力的分析被注入4周大的小鼠的肾皮质中，并在4周后去除肾脏进行组织学分析。在此分析中，未通过X-gal染色检测到蓝色的细胞，并且认为表现出EGFP表达的细胞在区分成肾小球上皮细胞，血管内皮细胞，管状细胞等之前就死亡。肾脏重建和肾脏组织再生的研究无法通过肾细胞进行培养，因为它无法进行培养，因此无法进行培养，因为它无法进行培养。失去肾脏祖细胞的特征。