制限増殖型アデノウィルスを用いた悪性胸膜中皮腫の遺伝子治療

使用限制性腺病毒对恶性胸膜间皮瘤进行基因治疗

基本信息

批准号：
18659239
负责人：
中西洋一
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

テロメラーゼプロモーター依存性制限増殖型アデノウィルス(Ad5/3hTERT-E1)によるin vitroでの殺細胞効果:ヒト悪性胸膜中皮腫細胞株H28、H226、H2052、H2452の4種の細胞株におけるテロメラーゼ活性をTRAPアッセイ法によって評価したところ良好な活性が認められた。これらの細胞株にAd5/3hTERT-E1を感染させ、その殺細胞効果をクリスタルバイオレットアッセイによって評価したところテロメラーゼ活性に依存した効果が確認された。in vivoにおける抗腫瘍効果:上記の4種類の細胞株についてヌードマウス胸腔における腫瘍形成能をスクリーニングした。その結果、H226細胞は胸膜面に沿って腫瘍を形成することが確認された。経時的な観察では移植後2週間で顕微鏡的に腫瘍形成を認め、4週間後には肉眼的に確認された。そこで、H226細胞の移植2週間後にマウスを2群に分け、治療群ではAd5/3hTERT-E1を、コントロール群ではルシフェラーゼ発現アデノウィルスを胸腔内に投与し生存期間を比較した。コントロール群では移植後40日以内に全例が死亡したが、治療群では有意ではなかったものの生存期間が延長する傾向にあった。また、ウィルス投与後に経時的に胸腔内におけるウィルス量を定量した。その結果、コントロールウィルスは急速に減少したが、Ad5/3hTERT-E1は9日後でも初回投与時を上回るウィルス量が観察され、in vivoにおいても明らかなウィルスの増殖を認めた。しかしながら、胸腔内におけるウィルスの拡がりについてはマウス胸膜へのウィルスの感染性が低く評価が困難であった。

端粒酶启动子依赖性限制性复制腺病毒(Ad5/3hTERT-E1)的体外细胞杀伤作用：TRAP对四种人恶性胸膜间皮瘤细胞系H28、H226、H2052和H2452的端粒酶活性进行测定时观察到良好的活性。方法。当用Ad5/3hTERT-E1感染这些细胞系并通过结晶紫测定评估细胞杀伤效果时，证实该效果依赖于端粒酶活性。体内抗肿瘤作用：筛选上述四种细胞系在裸鼠胸腔内形成肿瘤的能力。结果证实H226细胞沿着胸膜表面形成肿瘤。延时观察显示移植后两周显微镜下发现肿瘤形成，四周后宏观证实。因此，移植H226细胞两周后，将小鼠分为两组，通过向治疗组胸腔内施用Ad5/3hTERT-E1和向对照组胸腔内施用表达荧光素酶的腺病毒来比较存活时间。在对照组中，所有患者在移植后 40 天内死亡，但在治疗组中，存在生存时间延长的趋势，尽管这一趋势并不显着。此外，在病毒施用后，随着时间的推移对胸腔中的病毒量进行定量。结果，尽管对照病毒迅速减少，但Ad5/3hTERT-E1即使在9天后也显示出比首次施用时更高的病毒载量，并且在体内也观察到明显的病毒增殖。然而，由于病毒对小鼠胸膜的感染性较低，因此很难评估病毒在胸膜腔内的传播。