ES細胞をししたアルツハイマー病モデルサルの作成

使用ES细胞创建阿尔茨海默病模型猴

基本信息

批准号：
18659110
负责人：
遠山育夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本実験の目的は,ES細胞を利用してアルツハイマー病の遺伝子改変モデルサル作成を試みることである。昨年度は,最適なコンストラクトの作製と,サルES細胞への遺伝子導入技術の確立を行った。本年度は,まず,ヒトのアミロイド前駆体タンパク(APP)遺伝子プロモーターと変異APP遺伝子より構成されるコンストラクトを作製した。そして,昨年度の研究で最も良い成績を収めたリポフェクタミン法により,サルES細胞に遺伝子導入した。っいで,抗生物質G-418を用いて,ヒトAPP遺伝子の導入されたサルES細胞を選別した結果,安定してAPPタンパクを発現するES細胞株を2株樹立した。一方,共同研究者の鳥居は,核移植法の確立を試みて実験を行い,サルの核移植クローン胚の作製に成功した。そこで,現在,上記のES細胞株を用いて,核移植法によるアルツハイマー病モデルサルの作製とキメラサル作製に着手した。なお,神経難病の原因遺伝子を導入したカニクイザルES細胞の核をカニクイザルの除核した未受精卵に核移植し,活性化刺激を与え2〜4細胞期胚になったことを確認後,これを排卵2-3日目のレシピエントのカニクイザルの子宮あるいは卵管に移植する予定である。サルは齧歯類に比べ妊娠期間も長いので,本研究計画が順調に推移したとしても,実際の誕生はまだ先になる。本研究の成果の一部を国際学術誌で報告した。なお,本研究計画は,半数の外部委員を加えた動物生命科学研究倫理委員会で審査を受けて,承認されている。

该实验的目的是尝试使用ES细胞创建一个基因修饰的阿尔茨海默氏病模型。去年，我们创建了最佳构建体，并建立了将基因转染到猴子ES细胞的技术。今年，我们首先创建了一个由人淀粉样蛋白前体蛋白（APP）基因启动子和突变型APP基因组成的构造。然后，使用脂肪系方法将该基因转染到猴子ES细胞中，这在去年的研究中取得了最佳结果。因此，使用抗生素G-418对已引入人类APP基因的猴子ES细胞进行分类，并建立了稳定表达的APP蛋白的两种ES细胞系。同时，合作研究人员托里（Torii）试图建立一种核转移方法并进行了实验，并成功产生了猴子的克隆胚胎。因此，我们现在开始使用上述ES细胞系通过核转移来创建一个阿尔茨海默氏病和嵌合猴的模型猴子。此外，已与引起顽固性神经病的基因引入的cynomolgus猴子ES细胞的核被核转移到cynomolgus猴子的in核未使用的鸡蛋中，并在刺激后已将其应用于2-4细胞的激活阶段，我们将其应用于2-4个细胞的激活阶段。在排卵的2-3天内，cynomolgus猴子。猴子的妊娠期也比啮齿动物更长，因此，即使研究计划顺利进行，距离实际出生仍然还有很长的路要走。这项研究的一些结果是在国际学术期刊上报告的。此外，该研究计划得到了动物生命科学研究伦理委员会的审查和批准，其中包括一半的外部委员会成员。