生体内でのリアルタイム細胞系譜解析による幹細胞のプロスペクティブな同定

通过体内实时细胞谱系分析前瞻性鉴定干细胞

基本信息

批准号：
18659053
负责人：
清木誠
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659053/
关键词：
幹細胞細胞系譜メダカ運命地図

项目摘要

本研究では、脊椎動物の生きた個体において幹細胞をprospectiveに同定することを目的とした。そのために、生きた個体において細胞の分裂、移動、極性などの「細胞のふるまい」を観察できるメダカを用いて、標識した個々の細胞のふるまいのパターンを解析することにより、自己複製する幹細胞を同定することを目指し、そのための基礎技術の開発を行った。これまでに作られた細胞動態運命地図では、1細胞の標識は、蛍光色素の微量注入法が用いられてきた。しかし、蛍光色素が細胞分裂により希釈されるため、標識細胞を追跡できる時間には限界がある。そこで、標識した細胞が、何度分裂しても蛍光を持ち続ける方法を開発した。体の全ての細胞で働くと考えられるelongation factor alphaのメダカのプロモーターにGFPレポーター遺伝子を繋いだコンストラクト(京都大学木下博士より分与)を用いてトランスジェニックメダカを作成し、この胚から1細胞を移植することにより、標識細胞が長時間にわたって蛍光を持ち続けること可能にした。しかしながら、細胞の移植ができる時期が発生初期に限られるため、ヒートショック遺伝子のプロモーターにCreを繋ぎ、loxPで夾んだスペーサー断片が切り出されると蛍光を発するコンストラクトを作成を進めている。次に、胚発生期以降、経時的に、幹細胞が生成されるまでの長時間、標識された細胞の移動、分裂、形態の変化を記録した。現在、蓄積されたデータの解析を行い、幹細胞のふるまいの規則性から、生きた胚で組織幹細胞をprospectiveに同定できるかの検証を進めている。

这项研究旨在前瞻性地鉴定活脊椎动物个体中的干细胞。为此，我们旨在通过使用MEDAKA分析标记的单个细胞行为的模式来识别自我更新的干细胞，这使我们能够观察到“细胞行为”，例如生物中的细胞分裂，迁移和极性，并为此开发了基本技术。在先前创建的细胞动力学图中，荧光染料的显微注射已用于标记一个细胞。但是，由于荧光染料被细胞分裂稀释，因此可以跟踪标记的细胞的时间有一个限制。因此，我们已经开发了一种标记细胞保持荧光的方法，无论它们分裂了多少次。 Transgenic medaka was created using a construct (dispensed by Dr. Kinoshita, Kyoto University) that connects the GFP reporter gene to the promoter of medaka, an elongation factor alpha, which is thought to work in all cells of the body, and by transplanting one cell from this embryo, the labeled cells were allowed to continue to retain fluorescence for a long time.但是，由于可以移植细胞的时间仅限于发育的早期阶段，因此CRE与热休克基因的启动子连接，并在切除带有LOXP的间隔片段时会发出荧光的构造。接下来，随着时间的流逝，随着时间的推移，随着时间的推移记录了标记细胞的迁移，分裂和形态的变化，直到产生干细胞。当前，我们正在分析积累的数据，并验证基于干细胞行为的规律性在活胚中预测地鉴定组织干细胞。